脱分化脂肪細胞移植による側副血管リモデリングメカニズムの解明

去分化脂肪细胞移植阐明侧支血管重塑机制

基本信息

批准号：
21K08830
负责人：
山元智衣
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08830/
关键词：
血管リモデリング細胞治療脱分化脂肪細胞血管新生

项目摘要

脱分化脂肪細胞（DFAT）は、成熟脂肪細胞を天井培養法で培養することにより得られる間葉系幹細胞（MSC）に類似した多能性細胞であり、既に臨床研究において虚血改善効果を認めている。DFATの虚血改善作用は血管新生のみならず、虚血筋肉中の側副血管のリモデリングが促進したことが考えられ、本研究ではDFATと単球・マクロファージの相互作用に焦点を絞って検討を行なっている。移植実験では、免疫不全マウスを用いて側副血管の発達を評価できる下肢虚血モデルを作成した。このモデルマウスにヒトDFATおよびコントロールとして生理食洗水を移植し、経時的（3-7日）に大腿筋組織の組織切片を作成し、マクロファージに対する免疫染色を行なった。移植後3日目において、側副血管の発達はDFAT移植群と生理食塩水移植群において差を認めなかったが、DFAT移植群では側副血管周囲にマクロファージの集積が多く認められ、M1、M2マクロファージとも局在を認めた。特にM１マクロファージの集積が多く認められたが、7日目においてはM1マクロファージ、M2マクロファージともに減少が認められ、側副血管のリモデリングにはDFATによる早期のM１マクロファージの誘導が示唆された。虚血肢におけるDFATのマクロファージの誘導を検討するため、DFATがヒト単球由来細胞株THP-1に対して細胞遊走能を検討し、ヒトDFAT培養上清がTHP-1の遊走能を促進させることを認めた。さらにMCP-1 (Monocyte chemotactic protein-1) の関与を明らかにするためにMCP-1中和抗体を用いて同様にTHP-1遊走能を検討したところ、DFATのTHP-1に対する遊走能がキャンセルされた。このことによりDFATにはマクロファージの遊走能を促進させる作用があり、DFATが産生するMCP-1が関与する可能性が示唆された。

去分化脂肪细胞（DFAT）是通过天花板培养法培养成熟脂肪细胞而获得的类似于间充质干细胞（MSC）的多能细胞，并且已经在临床研究中显示出具有改善缺血的作用。 DFAT 的缺血改善作用被认为不仅是由于促进了缺血肌肉中的血管生成，而且还促进了侧支血管的重塑，在本研究中，我们重点研究了 DFAT 与单核细胞/巨噬细胞之间的相互作用。在移植实验中，我们使用免疫缺陷小鼠创建了下肢缺血模型，使我们能够评估侧支血管的发育。该模型小鼠被移植人DFAT和生理盐水作为对照，随着时间的推移（3-7天）制备大腿肌肉组织的组织切片并进行巨噬细胞的免疫染色。移植后第3天，DFAT移植组与生理盐水移植组侧支血管发育情况无差异，但DFAT移植组侧支血管周围观察到较多巨噬细胞，且M1、M2定位也用巨噬细胞观察到。特别是，观察到 M1 巨噬细胞大量积累，但在第 7 天观察到 M1 巨噬细胞和 M2 巨噬细胞均减少，表明 DFAT 早期诱导 M1 巨噬细胞参与侧支血管重塑。为了检查 DFAT 对缺血肢体中巨噬细胞的诱导作用，我们检测了 DFAT 对人单核细胞来源的细胞系 THP-1 的细胞迁移能力，发现人 DFAT 培养上清液促进了 THP-1 的迁移能力。。此外，为了明确MCP-1（单核细胞趋化蛋白-1）的参与，我们同样使用MCP-1中和抗体检查了THP-1的迁移能力，结果发现DFAT对THP-1的迁移能力被取消完成了。这表明DFAT具有促进巨噬细胞迁移能力的作用，DFAT产生的MCP-1可能参与其中。