膵島移植における免疫寛容誘導を目的とした細胞治療法の開発

开发旨在诱导胰岛移植免疫耐受的细胞疗法

基本信息

批准号：
21K08635
负责人：
渡辺正明
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08635/
关键词：
膵島移植免疫寛容細胞治療幹細胞移植

项目摘要

有効な免疫抑制細胞の誘導法の確立有効な免疫抑制細胞の誘導法の開発。マウス脾細胞、抗CD80/CD86抗体、CTLA4-lg抗体を用いて、有効な細胞誘導条件を見出す。誘導細胞のphenotypeをFACSで検証し、ドナー抗原に対する免疫抑制効果を、MLRで検証し、臨床膵島移植で応用可能な免疫抑制細胞誘導法を確立する。誘導された免疫抑制細胞を膵島や、再生医療学的手法で誘導された細胞を、移植後の細胞傷害の主体であるマクロファージ(RAW 264.7cell)や、Kupffer細胞と共培養し、細胞傷害の指標となるHMGB1、マクロファージ・Kupffer細胞の活性変化(IL-6, IL-12, TNF-α産生)、炎症反応や細胞機能に関わる遺伝子を解析するとともに、免疫抑制細胞が移植膵島、炎症担当細胞へ与える影響を検討する。これまでの我々の研究に準じ、免疫抑制細胞を同種同系マウス膵島移植モデルのレシピエントに輸注し、移植後早期の膵島傷害に対する効果をin vivoで検討する。細胞移植モデルを用いた免疫寛容誘導の検証齧歯類膵島移植モデルにおいて、免疫寛容誘導を検証する。誘導された免疫抑制細胞をマウスアロ膵島移植レシピエントに輸注し、移植膵島の生着期間延長効果を検証する。移植部位(肝臓)の炎症状態を、炎症サイトカイン発現(PCR)で検討し、さらにレシピエントの脾臓細胞を用いてMLR、IFN-g ELISPOT assayにて免疫抑制効果を検証する。大動物膵島移植モデルにおける免疫抑制細胞の有効な投与方法の検証臨床膵島移植は肝臓内移植が基本であるが、皮膚下、腎臓皮膜内など、他部位への移植も想定される。誘導された免疫抑制細胞の適切な投与方法、投与経路を検討する。

建立诱导免疫抑制细胞的有效方法开发诱导免疫抑制细胞的有效方法。我们将使用小鼠脾细胞、抗CD80/CD86抗体和CTLA4-Ig抗体找到有效的细胞诱导条件。我们将利用FACS验证诱导细胞的表型，利用MLR验证针对供体抗原的免疫抑制效果，建立可应用于临床胰岛移植的免疫抑制细胞诱导方法。诱导的免疫抑制细胞与胰岛共培养，利用再生医学技术诱导的细胞与移植后细胞损伤的主要原因巨噬细胞（RAW 264.7细胞）和库普弗细胞共培养，并用作免疫抑制细胞的指标。细胞损伤。 HMGB1、巨噬细胞/库普弗细胞活性变化（IL-6、IL-12、除了分析与炎症反应和细胞功能（TNF-α 产生）相关的基因外，我们还将检查免疫抑制细胞对移植的胰岛和负责炎症的细胞的影响。根据我们之前的研究，我们将把免疫抑制细胞注入同种异体小鼠胰岛移植模型的受体中，并在体内移植后早期检查它们对胰岛损伤的影响。使用细胞移植模型验证免疫耐受诱导我们将在啮齿类胰岛移植模型中验证免疫耐受诱导。将诱导的免疫抑制细胞注入小鼠同种异体胰岛移植受者体内，验证延长移植胰岛存活期的效果。将通过炎症细胞因子表达（PCR）检查移植部位（肝脏）的炎症状态，并通过使用受体脾细胞的MLR和IFN-g ELISPOT测定来验证免疫抑制效果。在大型动物胰岛移植模型中验证免疫抑制细胞的有效施用方法临床胰岛移植基本上是肝内移植，但也设想移植到其他部位，例如皮下或肾包膜内。将研究施用诱导的免疫抑制细胞的适当方法和途径。