シェーグレン症候群に対する病期・病態対応型シームレス医療の構築

建立针对干燥综合征疾病阶段和状况的无缝医疗服务

• 批准号: 20K10119
• 负责人: 東 雅之
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K10119/
• 关键词: 唾液腺; 腺房細胞; 導管細胞

1.病変前期段階での治療法確立について（in vitroでの解析）1)正常ヒト唾液腺導管細胞株(NS-SV-DC)及び腺房細胞株(NS-SV-AC)の未処理あるいはTNF-a処理におけるケモカインCXCL10,Mig,I-TAC mRNA及びこれらのケモカインレセプターであるCXCR3 mRNA発現をRエア1-チメRT-PCRにて検索した。2)間接蛍光抗体法にて各細胞株における未処理あるいはTNF-a、IFN-a、IFN-g処理におけるケモカイン、ケモカインレセプター発現を蛋白レベル、細胞局在レベルにて検索した。3)未処理あるいはTNF-a、IFN-a、IFN-g処理における培養上清中に存在するケモカイン含量をELISA法にて測定を行った。4)すでに我々は、SS患者の唾液中にはCXCL10が正常人唾液に比較して著明に高値を示していることを明らかにしていることから、CXCL10に焦点を絞りヒト抗CXCL10抗体製剤による培養細胞株へのケモカイン発現に及ぼす影響の解析を行った。5)SSモデルマウスより経時的に唾液腺組織を採取し、初代培養形成された上皮細胞におけるCXCL10、Mig、I-TAC CXCR3 mRNA発現をReal-time RT-PCRにて検索した。6)唾液腺組織における各ケモカインとCXCR3蛋白発現を免疫組織化学的に解析を行った。7)マウスからCXCR3+末梢血単核球を採取し、ケモカインへの遊走能を検索した。以上より、唾液腺導管細胞におけるケモカイン発現によるリンパ球遊走の促進とその抑制について解析を行った。2.病変後期段階での治療法の確立について（in vivoでの解析）1)本疾患モデルマウスにプロテアソーム阻害剤であるBortezomiobを腹腔内投与後、各時点での唾液腺の病理組織学的検索を行い、病変の進行度と治療効果の検討を行った。

1.病变早期治疗方法的建立（体外分析） 1）正常人唾液腺导管细胞系（NS-SV-DC）和腺泡细胞系（NS-SV-AC）未经处理或TNF趋化因子的表达使用Rair1-time RT-PCR研究了治疗中的CXCL10、Mig、I-TAC mRNA及其趋化因子受体CXCR3 mRNA。 2)使用间接荧光抗体方法在蛋白质水平和细胞定位水平上研究未处理或用TNF-a、IFN-a和IFN-g处理的各细胞系中趋化因子和趋化因子受体的表达。 3)通过ELISA测量未处理或用TNF-a、IFN-a和IFN-g处理的培养物上清液中存在的趋化因子含量。 4）由于我们已经证明SS患者唾液中的CXCL10显着高于正常人唾液中的CXCL10，因此我们专注于CXCL10并开发了人类抗CXCL10抗体制剂，我们分析了其对培养细胞系中趋化因子表达的影响。 。 5)随着时间的推移从SS模型小鼠中收集唾液腺组织，并使用实时RT-PCR寻找原代培养物中形成的上皮细胞中CXCL10、Mig和I-TAC CXCR3 mRNA的表达。 6)免疫组化分析唾液腺组织中各趋化因子和CXCR3蛋白的表达。 7)从小鼠中收集CXCR3+外周血单核细胞并检查它们向趋化因子迁移的能力。基于此，我们分析了唾液腺导管细胞中趋化因子表达对淋巴细胞迁移的促进和抑制作用。 2.关于病变后期治疗方法的建立（体内分析） 1）对该疾病模型小鼠腹腔给予蛋白酶体抑制剂硼替佐米后，对各时间点的唾液腺进行组织病理学检查。检查病变进展情况和治疗效果。