野生型マウス顎下腺上皮細胞株を用いた唾液腺組織再構成と分泌機能評価システムの構築

野生型小鼠颌下腺上皮细胞系唾液腺组织重建及分泌功能评价系统

• 批准号: 20K18569
• 负责人: 池浦 一裕
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Hospital Organization Tokyo Metropolitan Komagome Hospital
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K18569/
• 关键词: 唾液腺再生; 口腔乾燥; 細胞株; 分化誘導能; 筋上皮細胞; 腺房細胞; 導管上皮基底細胞; 唾液

加齢や放射線治療による唾液腺機能低下に伴う口腔乾燥症は患者の生活の質を著しく低下させる。そのため失われた唾液腺組織再生を試みる研究は多数報告されており、これらの研究ではヒト・ラットなどから樹立した唾液腺細胞株を用いているが、それらは腫瘍細胞由来・遺伝子改変動物由来であり、マウスにおける自然発生的な細胞株の報告はない。また唾液腺細胞を初代培養の表現型を保ちながら長期間培養することは困難とされ、現在までごく短期間の培養報告があるのみである。そこで本研究では唾液腺組織再生に有用な細胞源の確保と特性解析、さらに腺組織分泌機能評価が可能なシステム構築を行うことを目的とする。接着培養系では導管上皮基底細胞と同様の表現型を呈する細胞が得られたが、これらは低カルシウム、無血清、コレラトキシン、0.1%ゼラチンコートを用いた培養を行い分化を抑制した結果得られた細胞群である。そのためカルシウムや血清を用いた刺激を加えることで分化型細胞の特性を知ることが可能であると予想された。また三次元培養法を用いることで腺組織の再構築が可能ではないかと考えられた。そこで以下の2項目の検討を行った。（1）血清、カルシウム濃度勾配による刺激を加えることで筋上皮細胞誘導の可能性を検討した。その結果、1mMカルシウムおよび5%血清、さらに5ng/mlのTGF-β1添加による刺激を加えることで筋上皮細胞マーカーであるα-SMA陽性細胞が得られることが確認できたが、安定供給が可能な培地の検討が引き続きの検証課題である。（2）コラーゲンゲルを用いた三次元培養法により腺房構造の誘導を検討した。その結果、三次元培養を用いた細胞塊（Salivary Sphere）および管腔構造細胞塊（Cyst）の作製に成功した。腺組織分泌機能評価のアッセイ系確立に向けた細胞塊の作成と評価方法の検証が引き続きの課題である。

口干症与衰老或放射治疗导致的唾液腺功能下降有关，会显着降低患者的生活质量。因此，已经报道了许多研究试图再生丢失的唾液腺组织，并且这些研究使用从人类、大鼠等建立的唾液腺细胞系，但这些来自肿瘤细胞或转基因动物的报道还没有。小鼠自发细胞系。此外，人们认为难以在维持原代培养物的表型的同时长时间培养唾液腺细胞，并且迄今为止仅存在培养很短时间的报道。因此，本研究的目的是确保和鉴定对唾液腺组织再生有用的细胞来源，并构建可以评估腺组织分泌功能的系统。在贴壁培养系统中，获得了表现出与导管上皮基底细胞相似的表型的细胞，但这些细胞是通过用低钙、无血清、霍乱毒素和0.1％明胶涂层培养来抑制分化而获得的。 。因此，预计通过钙或血清的刺激可以了解分化细胞的特征。人们还认为可以使用三维培养方法重建腺组织。因此，我们调查了以下两项。 (1)我们研究了通过施加血清和钙浓度梯度刺激来诱导肌上皮细胞的可能性。结果证实，通过用1mM钙、5%血清刺激并添加5ng/ml TGF-β1获得了肌上皮细胞标志物α-SMA阳性细胞，并且可以稳定供应。对合适培养基的研究是一个持续验证的问题。 (2)我们利用胶原凝胶的三维培养方法研究了腺泡结构的诱导。结果，我们利用三维培养成功地创建了细胞簇（Salivary Sphere）和管腔结构细胞簇（Cyst）。持续的挑战包括细胞簇的创建和评估方法的验证，以建立用于评估腺组织分泌功能的测定系统。