口腔癌におけるangiogeninレセプターplexin-B2の発現と機能解析

血管生成素受体丛蛋白-B2在口腔癌中的表达及功能分析

基本信息

批准号：
20K10093
负责人：
岸本晃治
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K10093/
关键词：
angiogenin plexin-B2 口腔癌

项目摘要

(目的)Angiogenin(ANG)は、リボヌクレアーゼ活性を有する唯一の血管新生蛋白として発見されたが、内皮細胞のみならず癌細胞や神経細胞で細胞増殖、生存、再生能力などの様々な生物活性を有する。2017年に、ANGレセプターがplexin-B2(PLXNB2)であることが報告されて以来、癌や神経変性疾患におけるPLXNB2を介したANGの生物活性機序が注目されている。本研究では、口腔癌におけるPLXNB2の発現とANGをリガンドとするPLXNB2の機能解析を行うことにより、ANG-PLXNB2経路を標的とした新規口腔癌治療の可能性を明らかにする。(実施計画)1. PLXNB2の発現が強い培養口腔癌細胞HSC-3を選択し、以下の実験を行う。2. PLXNB2 shRNAプラスミド DNA (Sigma 社)を使用し、LipofectamineTM 3000 Transfection Reagentを用いて遺伝子導入する。6well dishに70%コンフルエントの細胞を用意する。Mediumは6h前からDMEM，FBS(-)とする。PLXN:SIGMA MISSION shRNA Plasmid DNA。Control:SIGMA MISSION pLKO.1-puro Non-Mammalian shRNA Control Plasmid DNA。2日培養後、puromycinにてセレクションを行う。3. Stable shRNA transfectantを作製し、wild populationとして培養後、クローニングする。(成果) 再度、培養口腔癌細胞HSC-3に対して、PLXNB2 shRNAプラスミド DNA を遺伝子導入した。そして、stable shRNA transfectantを作製した。細胞を回収後、ウエスタンブロット法でPLXNB2の発現を調べたが、やはり有意な低下は認められなかった。

（目的）血管生成蛋白（ANG）是唯一具有核糖核活性的血管蛋白，但不仅在癌细胞和神经细胞中，还具有各种生物学活性，例如细胞生长，生存和再生能力。自2017年据报道，ANG受体是Plexin-B2（PLXNB2），ANG通过PLXNB2在癌症中的生物学活性机制和神经调节性疾病引起了人们的注意。在这项研究中，PLXNB2在口腔癌中的表达以及PLXNB2的功能分析，配体阐明了针对ANG-PLXNB2途径的新口腔癌治疗的可能性。（实施计划）1。选择具有强PLXNB2表达的培养口腔癌细胞HSC-3并进行以下实验。 2。PLXNB2shRNA质粒DNA（Sigma）用于使用Lipofectaminetm 3000转染试剂引入基因。 6well Dish提供70％的混凝土细胞。培养基为DMEM和FBS（ - ）。 PLXN：Sigma Mission ShRNA质粒DNA。控制：Sigma Mission Plko.1-Puro非哺乳动物shRNA控制质粒DNA。在第二次培养后，在呼毒素中进行选择。 3。创建稳定的shRNA转移剂，并在培养后作为野生种群。（成就）再次将PLXNB2 shRNA质粒DNA引入培养的口腔癌细胞HSC-3。然后，创建了稳定的shRNA转移剂。恢复细胞后，通过Western印迹法检查了PLXNB2的表达，但未发现显着降低。