フルクトース代謝を標的とした糖尿病性腎臓病の病態解明と新規治療法の開発

阐明糖尿病肾病的病理学并开发针对果糖代谢的新疗法

• 批准号: 21K08254
• 负责人: 石本 卓嗣
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Aichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08254/
• 关键词: 糖尿病性腎臓病; フルクトース代謝

1) KHK-C依存的フルクトース代謝の抑制による、異常解糖系の改善・DKDの進展抑制効果を解明する。 CRISPR-Cas9システムにより作成したKHK-Cのみを欠損するKHK-C KOマウスおよびKHK-A KOマウス、KHK-A/C KOマウス、野生型マウスを用い、ストレ プトゾトシン誘導性の糖尿病モデルを作成した。経時的に採尿し、尿NGAL・尿アルブミン濃度をモニターしつつ、当初予定よりも観察期間を延長し、生後１０-１１ヶ月時点で採血・採尿・各種臓器の採取を行った。現在、腎障害の評価を開始している。また、KHK-Cを強制発現した不死化近位尿細 管細胞HK-2にフルクトース・グルコース刺激を行い、過剰なフルクトース代謝の解糖系(ECAR)・ミトコンドリア呼吸(OCR)への影響を、細胞外フラックスア ナライザーにより解析した。2)KHK-Cを選択的に阻害する核酸医薬を作成し、DKDおよびMS・脂肪肝に対する新規治療法を開発する。 KHK-Cを選択的に阻害するsiRNAを作成し、KHK-Cのノックダウン効率およびKHK-Aへの影響を含めたオフターゲット効果を評価した。同様の配列を用い、KHK-Cを 選択的に阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチドを作成した。同時に、アンチセンスオリゴヌクレオチドの腎尿細管細胞への導入効果を評価するため、先行して用意していたSGLT2を標的としたアンチセンスオリゴヌクレオチドをマウスに投与し、腎における発現抑制効果およびその体内分布の評価を行っている。

1)阐明抑制KHK-C依赖性果糖代谢对改善异常糖酵解和抑制DKD进展的作用。使用 KHK-C KO 小鼠、KHK-A KO 小鼠、KHK-A/C KO 小鼠和使用 CRISPR-Cas9 系统创建且仅缺乏 KHK-C 的野生型小鼠创建链脲佐菌素诱导的糖尿病模型。 。随着时间的推移收集尿液并监测尿液NGAL和尿白蛋白浓度，观察期比原计划延长，并在10-11月龄时收集血液、尿液和各种器官。我们目前正在开始评估肾损伤。此外，我们用果糖和葡萄糖刺激强制表达 KHK-C 的永生化近端肾小管细胞 HK-2，以研究过量果糖代谢对糖酵解 (ECAR) 和线粒体呼吸 (OCR) 的影响，并使用细胞外通量分析仪进行分析。 。 2）创建选择性抑制KHK-C的核酸药物，开发治疗DKD、MS和脂肪肝的新疗法。我们创建了选择性抑制 KHK-C 的 siRNA，并评估了 KHK-C 的敲低效率和脱靶效应，包括对 KHK-A 的影响。使用类似的序列，我们创建了一种选择性抑制 KHK-C 的反义寡核苷酸。同时，为了评价将反义寡核苷酸导入肾小管细胞的效果，将预先制备的靶向SGLT2的反义寡核苷酸给予小鼠，并对其分布进行评价。

项目成果

The usefulness of antisense oligonucleotide modified with serinol nucleic acid for kidney disease.

用丝氨醇核酸修饰的反义寡核苷酸在肾脏疾病中的用途。

• 发表时间: 2021
• 作者: Toshiki Tsuboi

Intimal growth on the luminal surface of arteriovenous grafts in rats

大鼠动静脉移植物管腔表面内膜生长

• DOI: 10.1007/s10157-023-02320-6
• 发表时间: 2023
• 影响因子: 2.3
• 作者: Ono Sumihisa;Hatayama Naoyuki;Miyamoto Kanyu;Naito Munekazu;Ishimoto Takuji;Ito Yasuhiko
• 通讯作者: Ito Yasuhiko

腎尿細管に対する新規人工核酸SNAを用いたアンチセンスオリゴヌクレオチド（ASO）の有用性の検討

使用新型人工核酸 SNA 检查反义寡核苷酸 (ASO) 对肾小管的有用性

• 发表时间: 2021
• 作者: 坪井俊樹

Association between serum magnesium levels and abdominal aorta calcification in patients with pre-dialysis chronic kidney disease stage 5

透析前慢性肾病 5 期患者血清镁水平与腹主动脉钙化的相关性

• DOI: 10.1371/journal.pone.0253592
• 发表时间: 2021-06-18
• 期刊: PLoS ONE
• 影响因子: 3.7
• 作者: Mayumi Ito;M. Yamaguchi;Takayuki Katsuno;H. Nobata;S. Iwagaitsu;H. Sugiyama;H. Kinashi;S. Banno;M. Ando;Y. Kubo;Takuji Ishimoto;Yasuhiko Ito
• 通讯作者: Yasuhiko Ito

Association between serum magnesium levels and abdominal aorta calcification in patients with pre-dialysis chronic kidney disease stage 5

透析前慢性肾病 5 期患者血清镁水平与腹主动脉钙化的相关性

• DOI: 10.1371/journal.pone.0253592
• 发表时间: 2021
• 影响因子: 3.7
• 作者: Ito M;Yamaguchi M;Katsuno T;Nobata H;Iwagaitsu S;Sugiyama H;Kinashi H;Banno S;Ando M;Kubo Y;Ishimoto T;Ito Y
• 通讯作者: Ito Y