ゴルジ体微小管の構築制御に基づく癌細胞の集団的浸潤機構の解明

基于高尔基体微管组装调控阐明癌细胞集体侵袭机制

基本信息

批准号：
20K07575
负责人：
西田満
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Fukushima Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでに、IFT20がゴルジ体の浸潤側への再配置を制御していることやリーダー細胞における安定化微小管の形成に関与していることを見出した。これらの知見を踏まえ、本年度はIFT20がゴルジ体由来微小管の安定化・極性化を制御する機構を理解するため、ゴルジ体由来微小管の動態をライブセルイメージングによって解析した。まず、複数の大腸癌細胞株に微小管プラス端マーカーであるEB1-GFPの発現プラスミドを導入し、安定発現株を複数樹立した。これら　の各細胞株について、ライブセルイメージング解析によりEB1-GFPの移動速度を計測した。その結果どの細胞株も同じスピードでEB1-GFPが移動することが確認されたため、以降はDLD1細胞の１クローンを主に用いて解析した。IFT20が浸潤細胞の微小管動態にどのような役割を担っているのか検討するため、EB1-GFP発現DLD1細胞の2D invasion assayにおいて、リーダー細胞でのライブイメージング解析を行った。EB1-GFPのトラッキング解析のため、MatLabおよびアドインソフトのU-Trackを用いた。各トラックの浸潤方向に対する角度（浸潤方向に伸長するものが0°、中心側へ伸長するものが180°となる）を計測した結果、コントロール細胞に比べIFT20ノックダウン細胞では浸潤方向（0°方向）に伸長する微小管の数が有意に低下した。さらに、IFT20をノックダウンしたリーダー細胞において、微小管伸長が一時的に停止する頻度が増加した。一方、微小管の伸長速度自体はIFT20ノックダウンによる変化は認められなかった。以上の結果から、DLD1細胞の集団的浸潤において、IFT20はリーダー細胞における極性化した微小管伸長を制御していることが示唆された。

到目前为止，已经发现IFT20调节高尔基体的迁移到侵入性侧，并参与了领导细胞中稳定的微管的形成。基于这些发现，今年，我们通过活细胞成像分析了高尔基衍生的微管的动力学，以了解IFT20控制高尔基衍生微管的稳定和极化的机制。首先，引入了多个结肠癌细胞系，并带有EB1-GFP的表达质粒，微管加端标记，并建立了多个稳定的表达菌株。对于这些细胞系中的每一种，通过实时细胞成像分析来测量EB1-GFP的运动速度。结果，已经证实EB1-GFP以相同的速度在所有细胞系中迁移，然后使用DLD1细胞的一个克隆进行了随后的分析。为了研究IFT20在浸润细胞的微管动力学中的作用，在对表达EB1-GFP的DLD1细胞的2D入侵测定中，在领导者细胞中进行了实时成像分析。 MATLAB和加载软件U型轨道用于跟踪EB1-GFP的分析。与对照细胞相比，在IFT20敲低细胞中，测量了每个轨道相对于入侵方向的角度（在入侵方向为0°，中央延伸为180°），并在IFT20敲除细胞中显着降低了在入侵方向（0°方向）的微管数。此外，微管延伸的频率暂时停止在引导细胞中击落IFT20。另一方面，由于IFT20敲低，微管延伸速度本身没有变化。这些结果表明，IFT20调节DLD1细胞集体侵袭的领导细胞中极化微管延伸。

项目成果

期刊论文数量（8）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

c-Src mediated phosphorylation and activation of KIF1C promotes invadopodia maturation in cancer cells

c-Src 介导的 KIF1C 磷酸化和激活促进癌细胞侵袭伪足成熟

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
佐事　武;西田　満;遠藤　光晴;岡田　康志;南　康博
通讯作者：
南　康博

Characterization of morphological alterations in micropapillary adenocarcinoma of the lung using an established cell line

DOI：
10.3892/or.2021.8230
发表时间：
2022-01-01
期刊：
ONCOLOGY REPORTS
影响因子：
4.2
作者：
Sonoda, Dai;Kamizaki, Koki;Satoh, Yukitoshi
通讯作者：
Satoh, Yukitoshi

Wnt5a-Rorシグナルが制御する細胞膜突起形成とがん細胞浸潤

Wnt5a-Ror信号调控细胞膜突起形成和癌细胞侵袭

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
紙崎孝基;佐事武;南康博;西田満
通讯作者：
西田満

Autonomous and intercellular chemokine signaling elicited from mesenchymal stem cells regulates migration of undifferentiated gastric cancer cells

间充质干细胞引发的自主和细胞间趋化因子信号传导调节未分化胃癌细胞的迁移

DOI：
10.1111/gtc.12933
发表时间：
2022
期刊：
Genes to Cells
影响因子：
2.1
作者：
Okamoto Daiki;Yamauchi Natsuko;Takiguchi Gosuke;Nishita Michiru;Kakeji Yoshihiro;Minami Yasuhiro;Kamizaki Koki
通讯作者：
Kamizaki Koki

Rif低分子量Gタンパク質の細胞内局在と機能の制御機構

Rif低分子G蛋白亚细胞定位及功能的调控机制

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
渡部祐亮;星京香;紙崎孝基;澁谷浩司;南康博;西田満
通讯作者：
西田満

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西田満其他文献

DNA損傷応答におけるチェックポイントとDNA修復のクロストーク機構の解析

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DOI：
发表时间：
2004
期刊：
放射線生物研究 39・3
影响因子：
0
作者：
Sakakida;Y.;西田満
通讯作者：
西田満

Regulation of Dishevelled in Wnt5a/Ror2 signaling

Wnt5a/Ror2 信号传导中 Disheveled 的调控

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
Matsumoto K;Shimizu C;Arao T;Andoh M;Katsumata N;Kohno T;Yonemori K;Koizumi F;Yokote H;Aogi K;Tamura K;Nishio K;Fujiwara Y;西田満;西田満
通讯作者：
西田満