ＨＩＶによるＴ細胞機能不全を回復する抗ミリストイル基ダイアボディによる治療法開発

开发使用抗肉豆蔻酰基双抗体恢复 HIV 引起的 T 细胞功能障碍的治疗方法

基本信息

批准号：
20K07526
负责人：
林宣宏
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

“HIVはその遺伝子産物であるNefによって、本来は感染宿主細胞（Ｔ細胞）が使用している弱い相互作用に介在して効果的に細胞機能を停止している”、という申請者の研究に基づく仮説と、独自の抗体ライブラリー技術を用いて、NefがＴ細胞の機能を停止するのを阻止するダイアボディ(２重特異性抗体)を抗ミリストイル基抗体と抗Nef抗体を使って作製し、エイズ治療のための分子標的薬プロトタイプを開発する。令和４年度は、先に作成したダイアボディ(２重特異性抗体)の性能が低いことが分かったので、新たに前年度までに取得していた複数のクローンから、抗HIV-Nef抗体と、抗ミリストイル基抗体のそれぞれに関してより性能の高いものを選んだ（モノクローナル化）。本年度は、それらをリンカーで繋いでダイアボディ(２重特異性抗体)を作製し、改めてその性能を評価する。他方、抗体創薬で必要な、抗体への細胞移入能力を付与するために、ファージ粒子由来の細胞透過タンパク質を付与した新規機能性抗体を開発した。この機能部位を付与することで、接種されたダイアボディが標的細胞内に移入されて、病原分子の機能を阻害出来るようになる。昨年度は、この分子針を付与しても、抗体の機能が損なわれないことを確認した。今年度はその分子針を新たに作成したダイアボディに付与して、その細胞移入能を調べる。さらに、先に作成した、機能アッセイに使用する、抗原（HEV Nef）を発現しているJurkat細胞を用いて、今後は細胞へ分子針が付加された抗体を導入し、導入後に細胞内で抗原抗体反応を確認すると共に、病原体により失われた細胞機能（CD4のダウンレギュレーション）の回復を確認することが課題である。

根据申请人的研究，使用该假设“ HIV通过其基因产物NEF有效使用的弱相互作用（T细胞）使用的弱相互作用，并通过其基因产物NEF使用”，以及我们将创建糖尿病生物（双特定抗体）使用NEF使用抗体抗体和抗体抗体抗体抗体和抗体抗体抗体抗体抗体抗体抗体，我们将创建抗体抗体和抗体抗体，以防止使用抗体和抗体抗体。分子靶向药物原型用于艾滋病治疗。在2022年，人们发现先前创建的生物体（双特异性抗体）的性能较低，因此我们从多个克隆中选择了抗HIV-NEF抗体和抗米尔司他酰基抗体，我们直到上一年才新获得的抗体抗体（单核化）。今年，我们将将它们与一个接头联系起来，以创建Diabodies（双特异性抗体），并再次评估其性能。另一方面，为了赋予将细胞转移到抗体发现是抗体药物发现所必需的抗体的能力，开发了一种新型的功能性抗体，该抗体是赋予源自噬菌体颗粒的可渗透蛋白的。通过分配该功能部位，接种型糖位被转移到靶细胞中，从而抑制致病分子的功能。去年，我们证实，即使应用了该分子针，抗体的功能也不会受到损害。今年，分子针将分配给新创建的射击体以检查其细胞转移能力。此外，面临的挑战是使用以前在功能测定中使用的抗原（HEV NEF）的Jurkat细胞，并在引入细胞中添加的分子针中引入抗体，并确认引入后细胞中的抗原抗体反应，并确认细胞功能的恢复（CD4下降）因病原体而丢失。