Crouzon症候群FGFR2変異型の硬組織形成異常解明による治療薬探索

通过阐明克鲁松综合征 FGFR2 变异的硬组织发育不良来寻找治疗药物

• 批准号: 21K09943
• 负责人: 鳥居 大祐
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: The Nippon Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09943/
• 关键词: Crouzon症候群; 頭蓋縫合早期癒合症候群; FGFR2; ゲノム編集; 一塩基置換

令和4年度は、CRISPR/Cas9を用いた一塩基置換法によって、Crouzon症候群のFGFR2変異のバリアントで最も報告の多いCys342Tyrについてモデル細胞を作製するため、歯髄幹細胞にヒトテロメラーゼ逆転写酵素（hTERT）遺伝子を導入し不死化細胞作製を行った。不死化後の細胞については、単クローン化を行い、hTERT遺伝子発現を確認したほか、もとの歯髄幹細胞と比較した多分化能の解析を現在行っている。また、今回作製予定のFGFR2Cys342Tyr変異細胞との性質の比較のため、別の箇所のFGFR2変異を有するCrouzon症候群患者由来歯髄幹細胞についてもhTERT遺伝子導入を行った。今回作製した不死化細胞を用いて、FGFR2Cys342Tyr変異Crouzon症候群モデル細胞作製を行うことで、その後の単クローン化やシーケンス解析等が可能になり、Crouzon症候群の分子生物学的解析をより進めることができると考えている。

2020财年，我们将在牙髓干细胞中使用人端粒酶逆转录酶（hTERT），通过使用CRISPR/Cas9的单核苷酸替换方法，创建Cys342Tyr的模型细胞，Cys342Tyr是最常见的克鲁宗综合征FGFR2突变变体。引入基因并创造了永生化细胞。永生化后，对细胞进行单克隆，并确认hTERT基因表达，目前正在分析与原始牙髓干细胞相比的多能性。此外，为了与我们计划生成的FGFR2Cys342Tyr突变细胞的特性进行比较，我们还将hTERT基因导入来自具有不同FGFR2突变的克鲁宗综合征患者的牙髓干细胞中。通过使用这次创建的永生化细胞来创建FGFR2Cys342Tyr突变克鲁宗综合征模型细胞，后续的单克隆和序列分析将成为可能，从而可以对克鲁宗综合征进行进一步的分子生物学分析。