神経障害後の細胞環境依存的な衛星細胞の機能変化と三叉神経の興奮性変調機構の解明

阐明神经损伤后卫星细胞的细胞环境依赖性功能变化和三叉神经的兴奋性调节机制

基本信息

批准号：
21K09867
负责人：
久保亜抄子
金额：
$ 2.66万
依托单位：
National Institute for Physiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度に引き続き、サテライトグリアの活性化と神経節細胞の興奮性変調の機能連関を解明するために、今年度は以下の点について研究を実施した。１．サテライトグリア細胞内水素イオン濃度のイメージング解析：昨年度、チャネルロドプシンの発現量が低く、うまく細胞内水素イオン濃度の変化を定量できなかったため、今年度は導入するアデノ随伴ウィルスベクター（AAV)を増量して実験を行った。三叉神経節にAAVを注入したラットから作製した三叉神経スライス標本に対し、水素イオン感受性蛍光色素を導入し、共焦点レーザー顕微鏡を使用してサテライトグリア細胞内水素イオン濃度の変化を解析した。光照射前後の画像を解析し、校正により刺激前後の水素イオン濃度を算出した結果、光照射前は7.0±0.92、光照射後は5.7±1.7となり、光照射により細胞内水素イオン濃度は有意に低下することが示された。２．培養サテライトグリアから放出されるグルタミン酸の解析：新生ラットから取り出したサテライトグリア培養細胞を刺激して、細胞外液中のグルタミンおよびグルタミン酸量を測定した。BzATPを添加する前後の細胞外グルタミン酸量を比較した結果、添加後には細胞外液中のグルタミン酸量は増加したが、vehicle投与群と比較して差はなかった。この結果からサテライドグリアは常時グルタミン酸を放出しており、BzATP刺激による放出の増加は本方法では検出できないことがわかった。３．サテライトグリアの光活性化による神経細胞の興奮性変化：チャネルロドプシンをサテライトグリアに発現させた三叉神経節内の神経節細胞からパッチクランプ記録を行った。光照射により三叉神経節細胞の基電流は低下し、興奮性が上昇した。

从去年开始，为了阐明卫星胶质神经胶质激活与神经节细胞兴奋性调节之间的功能连接，今年我们对以下几点进行了以下研究：1。卫星神经胶质细胞的细胞内氢离子浓度的成像分析：上一年，我们无法在频道上的浓度较低，我们在量化的浓度上越来越少，我们的量化程度较低，我们的量化程度较低，我们的量化量很高，因此我们的量化量越来越高，我们的量化量很高，因此我们的含量较低，我们的量化量很高，因此我们的含量较高，而我们的含量较高。引入细胞内氢离子浓度的量。将氢离子敏感的荧光染料引入了由注射AAV的大鼠制成的三叉神经切片标本中，并使用共焦激光显微镜分析了卫星神经胶质细胞中氢离子浓度的变化。分析了光照射之前和之后的图像，通过校准计算刺激前后的氢离子浓度，结果，发现在光照射之前，光照射之前为7.0±0.92，光照射后5.7±1.7，光照射后的含量为5.7±1.7，并且在光辐射后，细胞内的氢离子浓度显着降低了。 2。从培养的卫星神经胶质中释放的谷氨酸分析：刺激从新遗传大鼠中提取的培养的卫星胶质细胞，以测量细胞外液中谷氨酰胺和谷氨酸的量。在添加BZATP之前和之后比较细胞外谷氨酸的量时，添加后细胞外溶液中的谷氨酸量增加，但是与载体管理组相比没有差异。这些结果表明，卫星胶质不断释放谷氨酸，并且该方法无法检测到由BZATP刺激引起的释放增加。 3。由于卫星神经胶质的光活化而引起的神经元细胞的兴奋性变化：斑块夹记录是从三叉神经节内的神经节细胞中进行的，在该神经节中，卫星胶质蛋白在卫星神经胶质中表达。光照射减少了三叉神经节细胞的基本电流并增加了兴奋性。