膜型増殖因子と受容体の発光蛍光デュアルイメージングによる歯肉がんの浸潤機構の解析

膜型生长因子和受体发光荧光双重成像分析牙龈癌侵袭机制

基本信息

批准号：
21K09864
负责人：
福田信治
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Aichi Gakuin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

高齢化に伴い、日本の口腔がん罹患率は増加を続けている。肺がんや乳がんなどに比べ、口腔がんに特化した抗がん剤開発が遅れていることも問題である。このため、口腔がんの病態に関わる分子機構の解明や、治療標的となり得る分子群の特定は重要な課題となっている。本研究では、研究代表者がこれまで研究を進めてきた増殖因子EGFファミリーとEGF受容体シグナル伝達経路に焦点をあて、同リガンドファミリーが歯肉がん細胞の増殖や転移に果たす役割を明らかにする。EGFファミリーの分子が細胞表面でどのように分布するかを顕微鏡下で可視化するため、EGFファミリーの一員であるAmphiregulin (AREG)を発光酵素Gaussia Luciferase (GLase)との融合タンパク質として発現するプラスミドを構築した。発光顕微鏡を用いた観察を行うため、骨肉腫細胞HT1080に遺伝子導入したところ、AREGは細胞表面に検出され、分泌の瞬間が捉えられた。細胞が進展しているleading edgeの部分は特に顕著な極在が認められた。野生型GLaseは一過的に発光し、細胞表面における持続的な観察が難しいため、長時間撮影を可能にする変異体GLaseを構築し、AREG-GLaseのライブイメージングを行なった。現在、基質であるセレンテラジン濃度など、安定的にAREGを撮影するための条件検討を進めている。またEGFファミリーメンバーであるTGF-alphaとHB-EGFについても同様のプラスミド構築と歯肉がん細胞株Ca9-22の遺伝子導入条件の検討中である。また、歯肉がんと骨との関連として、同発光システムを使った骨関連タンパク質の分泌解析を行った。

随着人口老龄化，日本口腔癌的发病率持续增加。另一个问题是，专门针对口腔癌的抗癌药物的开发落后于肺癌和乳腺癌等其他癌症。因此，阐明口腔癌病理学的分子机制并确定可作为治疗靶点的分子群是重要的问题。在本研究中，我们将重点关注课题组迄今为止所研究的生长因子EGF家族和EGF受体信号通路，并阐明该配体家族在牙龈癌细胞增殖和转移中的作用。为了在显微镜下观察 EGF 家族分子如何分布在细胞表面，我们构建了一个质粒，表达 EGF 家族成员双调蛋白 (AREG)，作为与发光酶高斯荧光素酶 (GLase) 的融合蛋白。做过。当将该基因导入骨肉瘤细胞HT1080中，用发光显微镜观察时，在细胞表面检测到AREG，并捕捉到分泌的瞬间。在细胞生长的前沿观察到特别显着的定位。由于野生型 GLase 发光短暂，难以在细胞表面连续观察，因此我们构建了一种能够进行长期成像的突变型 GLase，并对 AREG-GLase 进行了实时成像。我们目前正在研究稳定 AREG 成像的条件，包括底物腔肠素的浓度。我们目前还在研究针对牙龈癌细胞系 Ca9-22 的 EGF 家族成员 TGF-α 和 HB-EGF 的类似质粒构建和基因导入条件。此外，为了研究牙龈癌与骨之间的关系，我们使用相同的发光系统来分析骨相关蛋白的分泌。