WNTアンタゴニストSFRP5によるWNT非依存的な骨代謝調節機構の解明

WNT拮抗剂SFRP5阐明不依赖WNT的骨代谢调节机制

• 批准号: 21K09216
• 负责人: 村上 康平
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Okayama University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09216/
• 关键词: WNTシグナル; 骨芽細胞; SFRP5; 骨形成; 骨代謝; Sfrp5; Wntシグナル

多くのWNTリガンドは骨形成を促進する。そのため、既知のWNTアンタゴニストは骨形成を抑制し、骨量を減少させる。Secreted frizzled-related protein 5（Sfrp5）は、脂肪細胞が分泌するWNTアンタゴニストである。申請者はSfrp5欠損マウスの骨を解析し、Sfrp5が破骨細胞の形成を抑制し、骨芽細胞の分化を促進することで、骨量を増加させることを発見した。本申請課題では、Sfrp5の骨代謝調節メカニズムを明らかにし、WNTアンタゴニストSfrp5の新たな一面を解き明かす。研究計画に則って、Sfrp5の作用を生体で確かめる実験を行った。Sfrp5または蛍光レポーター（ZsGreen）を過剰発現するアデノ随伴ウイルスを作製した。これを8週齢のマウスに静脈内投与したところ、骨芽細胞、骨細胞、破骨細胞での蛍光レポーターの発現が確認された。処置後4週目において、Sfrp5の過剰発現によって破骨細胞の形成は抑制された。しかしながら、骨量の増加が観察されなかった。また、Sfrp5が骨芽細胞の分化を促進する機序を解明するための実験を行った。共免疫沈降・質量分析により、Sfrp5と相互作用する候補分子を複数みつけた。これらに対するshRNAを発現する組換えアデノウイルスを作製した。組換えアデノウイルスを骨芽細胞に感染させ、骨芽細胞の分化を抑制する因子を複数みつけた。つまり、Sfrp5は骨芽細胞の分化を抑制する因子を拮抗することで、骨芽細胞の分化を抑制する可能性が考えられた。骨芽細胞の微量転写開始点解析技術（CAGE）により、Sfrp5が活性化する転写因子の候補を同定した。これらの転写因子を発現させる組換えアデノウイルスを作製し、骨芽細胞に発現させたところ、骨芽細胞の分化を促進する転写因子Xを同定した。今後、Sfrp5が転写因子Xを活性化させる機序を解明する。

许多Wnt配体促进骨形成。因此，已知的Wnt拮抗剂抑制骨形成并减少骨骼量。分泌的卷曲相关蛋白5（SFRP5）是脂肪细胞分泌的Wnt拮抗剂。申请人分析了SFRP5缺陷型小鼠的骨骼，发现SFRP5通过抑制破骨细胞形成并促进成骨细胞分化来增加骨骼量。该应用将阐明SFRP5的骨代谢调节的机制，并阐明Wnt拮抗剂SFRP5的新方面。根据研究计划，进行了实验，以确认SFRP5在活生物体中的影响。过表达SFRP5或荧光报告基因（Zsgreen）的腺相关病毒。这是对8周大的小鼠静脉内给药的，并确认了成骨细胞，破骨细胞和破骨细胞中荧光报道的表达。治疗后4周，SFRP5的过表达抑制了破骨细胞的形成。但是，未观察到骨骼量的增加。我们还进行了一个实验，以阐明SFRP5促进成骨细胞分化的机制。共免疫沉淀和质谱法揭示了与SFRP5相互作用的多个候选分子。产生了表达shRNA的重组腺病毒。成骨细胞被重组腺病毒感染，发现几个因素抑制成骨细胞分化。换句话说，人们认为SFRP5可以通过拮抗成骨细胞分化的因子来抑制成骨细胞分化。成骨细胞痕量转录起源分析技术（CAGE）确定了激活SFRP5的候选转录因子。确定了表达这些转录因子的重组腺病毒，并在成骨细胞中表达并表达了促进成骨细胞分化的转录因子X。将来，我们将阐明SFRP5激活转录因子X的机制。

项目成果

Down-regulation of PD-L2 is a poor prognostic marker in dogs with high-grade mast cell tumor

PD-L2 下调是患有高级别肥大细胞肿瘤的犬的不良预后标志物

• 发表时间: 2023
• 作者: Kohei Murakami;Daichi Hanai;Ryusei Kimura;Ikki Mitsui;Jiro Miyamae;Akira Matsuda;Hiroaki Hemmi
• 通讯作者: Hiroaki Hemmi

Expression profile of immunoregulatory factors in canine tumors

犬肿瘤中免疫调节因子的表达谱

• DOI: 10.1016/j.vetimm.2022.110505
• 发表时间: 2022
• 期刊: Veterinary Immunology and Immunopathology
• 影响因子: 1.8
• 作者: Murakami Kohei;Miyatake Saki;Miyamae Jiro;Saeki Kanna;Shinya Mizutani;Akashi Natsuki;Mitsui Ikki;Kobayashi Kosuke;Saeki Kohei;Maeta Noritaka;Kanda Teppei;Okamura Yasuhiko;Hemmi Hiroaki
• 通讯作者: Hemmi Hiroaki

犬の腫瘍における免疫制御分子の発現プロファイル

犬肿瘤中免疫调节分子的表达谱

• 发表时间: 2023
• 作者: 宮武咲妃;宮前二朗;邊見弘明;村上康平
• 通讯作者: 村上康平

イヌ肺腺癌より樹立した上皮系および間葉系様細胞株の性状解析

犬肺腺癌上皮样和间质样细胞系的特征分析

• 发表时间: 2022
• 作者: Takeuchi A;Yamamoto N;Ohmori T;Hayashi K;Miwa S;Igarashi K;Higuchi T;Abe K;Yonezawa H;Morinaga S;Araki Y;Asano Y;Saito S;Tsuchiya H.;Teramoto A;小林宏祐，村上康平，佐伯亘平，杉山晶彦
• 通讯作者: 小林宏祐，村上康平，佐伯亘平，杉山晶彦

Inhibitor of protein kinase N3 suppresses excessive bone resorption in ovariectomized mice

• DOI: 10.1007/s00774-021-01296-1
• 发表时间: 2022-01
• 期刊: Journal of Bone and Mineral Metabolism
• 影响因子: 3.3
• 作者: Shunsuke Uehara;H. Mukai;T. Yamashita;M. Koide;Kohei Murakami;N. Udagawa;Yasuhiro Kobayashi