Development of molecular-targeted anticancer agents for epigenetic changes in malignant glioma

开发针对恶性胶质瘤表观遗传变化的分子靶向抗癌药物

• 批准号: 21K09150
• 负责人: 椎野 顯彦
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Shiga University of Medical Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09150/
• 关键词: 悪性神経膠腫; 分子標的薬; lipid nanoparticle; m-RNA; glioblastoma; molecular targeted; anti-cancer agent; エピゲノム; 血液脳関門; ナノエマルジョン

これまでのファージディスプレイの研究で、静脈投与でglioblastoma xenograft モデルの脳腫瘍に選択的に到達可能なペプチドプローブを開発した。特に注目すべきは、腫瘍幹細胞にも取り込まれていたことである。しかしながら、その後の研究で一旦取り込まれてもエンドゾームで分解・代謝され、抗腫瘍効果があまり得られないことが判明した。エンドゾームの作用を回避する目的で、ナノエマルジョンにプローブを表出させ、内部に抗腫瘍薬物を封入することにした。vitro系では、エマルジョンが腫瘍細胞膜にfusionし内部の薬剤を到達させ、腫瘍細胞を死滅させることを確認した。vivoで同様の効果が得られるかを確認する目的で、テトラフエニルポルフィリンでPeptide-Brij58エマルジョンがglioblastoma xenograft モデルで脳腫瘍に集積するか検討するためのセットアップをした。その結果、peptide emulsion が腫瘍に集積していることをimaging, 蛍光発光の定量化で証明できた。具体的な手法は以下の通り。Nitroxide radicalがテトラフエニルポルフィリンの蛍光をクエンチするため、まずは、磁性ナノ粒子を還元することによって蛍光検出するための条件検討を実施。ascorbic acid 5mM, 40mM, 200mM,500mM で110分　処理することで経時的にペプチドエマルジョンに抱合されたテトラフエニルポルフィリンの蛍光が回復する過程の定量化を実施。その結果、ascorbic acid　500mM で110分処理することが必要との結果を得た。glioblastoma xenograft モデルでテトラフエニルポルフィリンを取り込ませたPeptide-Brij58　エマルジョンを投与し30分後に脳を摘出し、薄切の後、ascorbic acid　500mM で110分処理を行い、テトラフエニルポルフィリンの脳腫瘍への集積を確認すると同時に、脳腫瘍のhomogenate を用いてテトラフエニルポルフィリン蛍光を定量化し、その脳腫瘍への蓄積を証明した。

先前的噬菌体显示研究已经开发了肽探针，可以通过静脉内给药在胶质母细胞瘤模型模型中选择性地到达脑肿瘤。特别值得注意的是，它也被掺入肿瘤干细胞中。然而，随后的研究表明，即使被占用，它也会被内体降解和代谢，并且不会产生太多的抗肿瘤作用。为了避免内体的作用，我们决定在纳米乳液中显示探针，并将抗肿瘤药物封装在内部。在体外系统中，可以证实乳液融合到肿瘤细胞膜中，从而使内部药物到达肿瘤细胞，杀死肿瘤细胞。为了确认在体内是否可以实现类似的作用，我们建立了肽 - 勃起乳液的乳液，该乳液在胶质细胞瘤特征模型中用四苯基卟啉积聚在脑肿瘤中。结果，我们能够通过量化荧光发射来证明辣椒乳液在肿瘤中积累。特定方法如下：由于硝基自由基淬灭四苯基卟啉的荧光，因此首先研究了通过还原磁性纳米颗粒来检测荧光的条件。我们通过用抗坏血酸5mm，40mm，200mm和500mm进行110分钟来恢复，量化了与肽乳液相结合的四苯基孢子蛋白的荧光量化的过程。结果，我们发现有必要用500mm治疗抗坏血酸110分钟。在胶质母细胞瘤特征模型中施用了掺入四苯基孢子蛋白的肽-Brij58乳液，并在30分钟后去除大脑，切片后，用抗坏血酸500 mm处理110分钟，以确认甲肾上腺素的积累，并在同一脑中的积累，并在同一时间内累积了脑部，并在同一时间内进行了TRAPHINCER，TORKERING tRAPHING tRAPHER tIMERID PARKERINCH tIMERING tIMERING tIMERTID PARKERINCHING tIMERING tIMERING y MASTERMENTAPHING tIMERINC脑肿瘤，证明其在脑肿瘤中的积累。