脳虚血時の一酸化窒素の功罪

一氧化氮在脑缺血时的优点和缺点

基本信息

批准号：
07771092
负责人：
椎野顯彦
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Shiga University of Medical Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771092/
关键词：
nitric oxide cerebral ischemia n‐NOS zaprinast FK‐506 NOS inhibitor cerebral blood flow

项目摘要

血管内皮によるNOを介した調節の他に、NO含有神経終末による脳循環調節機構の存在を示唆する報告がある。そこで、“脳虚血時にnc‐NOSはサイクリックGMPを介して血管を拡張させ、側副循環を改善する"という仮説をたて、実験を行った。ラット中大脳動脈閉塞直後に、nc‐NOSを選択的に抑制するFK506を投与すると、非投与群に比べ12.2%の梗塞巣拡大が認められた。この効果はzaprinastの投与により消失した。虚血時のNO放出がc‐GMPを介して血管を拡張させ、梗塞巣を縮小することの間接証拠である。尚、梗塞面積は、中大脳動脈閉塞から24時間後にTTCで染色、梗塞巣の面積をNEXUS‐10122にて計測した。同じ中大脳動脈閉塞モデルにおいてFK506のvivoでのnc‐NOSに対する作用を調べる目的で、ラット脳のNOを経時的に測定した。NOの測定には電極法の予定であったが、得られたデータに疑問があるため、microdialysis用いたサンプリングによるNO_2とNO_3の測定を併せて行い、脳のNO産生量を推測した。結果、虚血早期と再開通直後に脳のNOレベルが上昇することを確かめた。測定したNOは、主としてN‐cNOS由来と思われるが、FK506は予測に反して、このNOの産生を抑制しなかった。この結果は、培養細胞による従来の結果と反するもので、現在原因を検討中である。ラットの頭蓋骨の骨窓から、CCDカメラで脳表の血管を観察した。画像はビパーソナルコンピューターに転送し、経時的な血管径の計測を行なった。結果、zaprinastは虚血巣周囲の細動脈をさらに拡張させ、血小板の内皮細胞への付着を抑制した。一方、FK506は虚血巣周囲の細動脈の拡張を抑制した。FK506のこの効果が、NO含有神経終末を介した作用である直接の証拠はいまのところないが、今後検討していゆく予定である。

除了血管内皮细胞介导的NO介导的调节之外，有报道表明含有NO的神经末梢存在脑循环调节机制。因此，我们推测“脑缺血时nc-NOS通过环磷酸鸟苷扩张血管并改善侧支循环”，并进行了实验。当大鼠大脑中动脉闭塞后立即给予选择性抑制nc-NOS的FK506时，与未给予组相比，观察到梗塞扩大了12.2%。通过给予扎普司特消除了这种作用。这是缺血期间 NO 释放通过 c-GMP 扩张血管并减少梗塞面积的间接证据。大脑中动脉闭塞24小时后对梗塞面积进行TTC染色，并使用NEXUS-10122测量梗塞面积。为了在同一大脑中动脉闭塞模型中研究FK506对体内nc-NOS的影响，我们测量了大鼠脑中NO随时间的变化。我们原本计划使用电极法来测量NO，但由于对获得的数据存在疑问，我们还通过微透析采样测量了NO_2和NO_3，以估计大脑中NO的产生量。结果，我们证实脑内NO水平在缺血早期和血管再通后立即升高。测得的 NO 似乎主要来自 N-cNOS，但与预期相反，FK506 并没有抑制这种 NO 的产生。这一结果与之前使用培养细胞的结果相反，目前正在调查原因。使用CCD相机通过大鼠头骨的骨窗观察大脑表面的血管。将图像传输到双个人计算机，并随着时间的推移测量血管直径。结果，扎普司特进一步扩张缺血灶周围的小动脉并抑制血小板与内皮细胞的粘附。另一方面，FK506 抑制缺血灶周围小动脉的扩张。尽管目前没有直接证据表明 FK506 的这种作用是由含 NO 的神经末梢介导的，但我们计划在未来对此进行研究。