敗血症における血管内皮細胞で産生されるsFlt-1の役割の解明

阐明血管内皮细胞产生的 sFlt-1 在脓毒症中的作用

基本信息

批准号：
21K09031
负责人：
池田崇之
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kanazawa Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09031/
关键词：
sFlt-1 血管内皮細胞 LPS 敗血症血管内皮 VEGF VEGFR-1

项目摘要

敗血症患者では、血管内皮増殖因子VEGFの可溶型受容体であるsFlt-1の血中濃度が重症化に伴い上昇しているが、敗血症の進展と重症化におけるsFlt-1の役割は明らかになっていない。sFlt-1の主要産生臓器である血管内皮細胞特異的にsFlt-1をノックダウンするマウスを作成し、敗血症モデルによりsFlt-1の役割を解明する。敗血症におけるsFlt-1の役割を直接解析するために、血管内皮細胞特異的、かつ時期特異的にsFlt-1をノックダウンできるシステムを構築した。テトラサイクリン依存的にmiRNAを発現するために、Fellmannら（Cell Rep. 2013）が構築したシステムを参考に発現ベクターを作製した。このベクターでは、テトラサイクリン依存的にGFPが発現し、その3'UTRにあるmiRNAが機能する。マウスsFlt-1安定発現Tet-on細胞にレンチウイルスによりmiRNAを発現させ、GFP発現細胞をソーティングにより選択した後、マウスsFlt-1 mRNAをqPCRにより解析した。２種類のmiRNA配列で、いずれも３割り程度まで発現が抑制されていることが確認された。タンパク質レベルを確認後、トランスジェニックマウス作成に進む予定である。sFlt-1の産生を制御するタンパク質の同定を行った。sFlt-1産生制御配列付近のRNA配列をプローブにして、結合するタンパク質を質量分析により解析したところ、３種類のRNA結合タンパク質が候補として同定された。それぞれの遺伝子をクローニングし、初代培養ヒト微小血管内皮細胞に過剰発現させたところ、タンパク質XがsFlt-1の発現を抑制したことから、タンパク質XがsFlt-1産生制御因子の可能性が示唆された。

在败血症患者中，SFLT-1的血液水平是一种血管内皮生长因子VEGF的可溶性受体，随着严重程度的增加而增加，但是SFLT-1在败血症的发育和严重程度中的作用尚未澄清。我们创建的小鼠在血管内皮细胞（SFLT-1的主要生产器官）中专门击倒SFLT-1，并使用败血症模型阐明了SFLT-1的作用。为了直接分析SFLT-1在败血症中的作用，构建了一个可以在血管内皮细胞中并及时击倒SFLT-1的系统。为了以四环素依赖性方式表达miRNA，使用Fellmann等人构建的系统制备了表达矢量。（CellRep。2013）。在此矢量中，GFP以四环素依赖性方式表达，而位于3'UTR函数中的miRNA表示。 miRNA通过慢病毒在小鼠SFLT-1稳定表达Tet-on细胞上表达，并通过排序选择表达GFP的细胞，并通过qPCR分析了小鼠SFLT-1 mRNA。已经证实，两种类型的miRNA序列的表达被抑制至约30％。确认蛋白质水平后，我们计划继续创建转基因小鼠。鉴定了调节SFLT-1产生的蛋白质。当使用SFLT-1产生控制序列附近的RNA序列作为探针，并通过质谱分析结合蛋白时，将三种类型的RNA结合蛋白鉴定为候选者。当每个基因在原发性培养的人微血管内皮细胞中克隆并过表达时，蛋白X抑制了SFLT-1的表达，这表明蛋白X可能是SFLT-1产生的调节剂。

项目成果

期刊论文数量（9）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

コラーゲン・トリペプチドは血管内皮細胞を酸化ストレスから保護する効果を持つ

胶原三肽具有保护血管内皮细胞免受氧化应激的作用

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
高辻英仁;吉冨泰央;石垣靖人;山本祥子;沼田徳暁;酒井康夫;竹内正義;友杉直久;勝田省吾;米倉秀人;池田崇之
通讯作者：
池田崇之

Metformin Mitigates DPP-4 Inhibitor-Induced Breast Cancer Metastasis via Suppression of mTOR Signaling

DOI：
10.1158/1541-7786.mcr-20-0115
发表时间：
2021-01-01
期刊：
MOLECULAR CANCER RESEARCH
影响因子：
5.2
作者：
Kawakita, Emi;Yang, Fan;Koya, Daisuke
通讯作者：
Koya, Daisuke

EPAC2はヒト微小血管内皮細胞の管腔形成において負の制御因子として働く

EPAC2 作为人微血管内皮细胞管腔形成的负调节因子

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
池田崇之;吉竹佳乃;吉冨泰央;高辻英仁;石垣靖人;米倉秀人
通讯作者：
米倉秀人

うつモデルマウスの脳海馬で発現変動する遺伝子の探索と役割の解明

寻找抑郁模型小鼠海马表达变化的基因并阐明其作用

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
高辻英仁;吉冨泰央;池田崇之;山本亮; 加藤伸郎;米倉秀人
通讯作者：
米倉秀人

発生期の血管ネットワーク形成におけるTip cell転写因子JunBの役割

Tip细胞转录因子JunB在新生血管网络形成中的作用

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
吉冨泰央;池田崇之;高辻英仁;米倉秀人
通讯作者：
米倉秀人

DOI：
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通讯作者：
井上貴雄