LPS暴露腸間膜由来血管内皮細胞がNAFLD病態形成に果たす役割の解明

阐明暴露于 LPS 的肠系膜来源血管内皮细胞在 NAFLD 发病机制中的作用

• 批准号: 20K08301
• 负责人: 西島 亜紀
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Fujita Health University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K08301/
• 关键词: NAFLD; エンドトキシン; 内臓脂肪組織; 血管内皮細胞; dysbiosis

10－12週齢ラットの腸間膜脂肪組織を無菌的に採取し、細切したのち、コラゲナーゼ消化、メッシュでろ過することで脂肪組織由来stromal vascular fraction (SVF)を単離した。SVFを継代した増加させたのち、ビーズ法を用いて血管内皮細胞を回収した。内皮細胞用培地を用いて脂肪組織由来血管内皮細胞（ATDECs）を培養した。昨年度に細胞障害が出ないことを確認した量（1 ng/ml）のlipopolysaccharide (LPS)を添加し、ATDECsのextracellular vesicles (EVs)を回収した。このLPS (+/-) ATDECs-EVsおよびconditioned mediaをラット内臓脂肪組織（VAT）器官培養の培地に添加し、標本作製し形態を観察した。コントロールと比較したが明らかな差異は見られなかった。免疫染色にてCD34, CD31, αSMA, CD45, CD68を行ったがこちらも有意な所見は得られなかった。また、この培養系で回収した上清を用いてadiponectin, leptinを測定（ELISA）したが、adipokinesの分泌量に変化は認められなかった。

从10-12周大鼠的肠系膜脂肪组织无菌收集，切断，然后通过网格消化并过滤胶原酶，以分离脂肪组织的基质血管分数（SVF）。通过SVF通过后，使用珠方法收集血管内皮细胞。使用内皮细胞培养基培养脂肪组织衍生的血管内皮细胞（ATDEC）。将脂多糖（LPS）的量（1 ng/ml）添加到去年确认不会引起细胞损伤的脂多糖（LPS）的量中，并收集了ATDEC的细胞外蔬菜（EV）。将LPS（+/-）ATDEC-EV和条件培养基添加到大鼠内脏脂肪组织（VAT）器官培养的介质中，并观察到标本并观察到形态。与对照组相比，没有发现明显的差异。使用CD34，CD31，αSMA，CD45和CD68进行免疫染色，但也没有获得显着的发现。此外，使用该培养系统中收集的上清液测量脂联素和瘦素（ELISA），但分泌的脂肪因子量未观察到任何变化。