腫瘍血管内皮細胞のimmune set point制御スイッチとしての機能の解明

阐明肿瘤血管内皮细胞作为免疫设定点控制开关的功能

基本信息

批准号：
21K08891
负责人：
羽藤泰
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Saitama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

腫瘍血管内皮細胞の抗腫瘍免疫制御機構の解析を行っている。初年度にin vivo実験を行い、抗VEGFR2治療による抗腫瘍免疫応答の改変を確認し、二年目以降にin vitro実験でメカニズムを明らかとする計画である。本年度は、計画に従って、in vitroのモデルを中心に実験を実施した。C57BL/6Jマウスで作成したExLLC由来腫瘍を摘出し、単一細胞に分けたあと、これをスフェロイド培養に供した。血管内皮細胞をCD31磁気ビーズを用いて除去するものと、しないものに分け、通常大気と低酸素（１％O2)に分けて３日間培養を実施した。本研究ではVEGFR2の免疫制御スイッチとしての機構を解析するため、培養上清に抗VEGFR2抗体を添加し、培養上清でのINF-γ、IL-2発現をELSIAで定量し、腫瘍及び間質細胞でのPD-L1発現強度を免疫染色で定量した。低酸素下では単純なスフェロイド培養においては、IFN-γおよびIL-2の培養上清内での発現量は通常大気下での培養に比べてわずかに低下が見られたが統計学的な有意差には至らなかった。一方で、抗VEGFR2抗体を上清に添加し、低酸素下で同培養を実施すると、IFN-γ発現量はほぼ倍増し、IL-2発現も上昇する傾向が認められた。CD31ビーズを用いて血管内皮細胞を除去すると、VEGFR2由来のIFN-γ及びIL-2発現の上昇は観察されなかったことから、低酸素化での免疫応答活性が腫瘍血管内皮細胞由来のメカニズムであることが示された。途中経過は得られているが、学会発表および論文などでの成果発表には至らなかった。

我们正在对肿瘤血管内皮细胞的抗肿瘤免疫控制机制进行分析。该计划将在第一年进行体内实验，以确认通过抗VEGFR2处理对抗肿瘤免疫反应的修饰，并在第二年后阐明体外实验中的机制。今年，实验主要根据计划进行体外模型进行。在C57BL/6J小鼠中产生的EXLLC衍生的肿瘤被去除，分为单个细胞，然后受到球体培养。将血管内皮细胞分为使用CD31磁珠和未去除的血管内皮细胞，并在正常大气和缺氧中培养三天（1％O2）。在这项研究中，为了分析VEGFR2作为免疫调节开关的机制，使用ELSIA中添加了抗VEGFR2抗体，在培养上清液中添加了抗培养物上清液，INF-γ和IL-2表达在使用ELSIA中定量，并使用免疫染色来定量肿瘤和脊髓细胞中的PD-L1表达强度。在缺氧下的简单球体培养物中，培养上清液中IFN-γ和IL-2的表达水平略低于大气中的表达水平，但没有统计学上的显着差异。另一方面，当将抗VEGFR2抗体添加到上清液中并在缺氧下进行相同的培养物时，IFN-γ表达水平几乎增加了一倍，并且也认为IL-2表达增加了。当使用CD31珠去除血管内皮细胞时，观察到VEGFR2衍生的IFN-γ和IL-2表达没有增加，表明缺氧期间的免疫反应活性是源自肿瘤血管内皮细胞的机制。尽管在中间取得了进展，但在会议演讲或论文中没有提出结果。