ヒトiPS細胞を用いた自己免疫性下垂体疾患の病態解明

使用人类 iPS 细胞阐明自身免疫性垂体疾病的病理学

基本信息

批准号：
21K08555
负责人：
井口元三
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08555/
关键词：
自己免疫性下垂体疾患 iPS細胞抗PIT-1下垂体炎

项目摘要

本研究では、ヒトiPS細胞と腫瘍免疫の技術を応用し、アンメット・メディカル・ニーズが高い自己免疫性下垂体疾患の病態解明のための疾患モデルを確立する。さらに、原因となる普遍的メカニズムの特定を通じて、新たな診断法および治療法の開発に繋げることを目指す。Step①：患者由来のiPS細胞（AP01株）から下垂体組織を生成し、ターゲット抗原蛋白PIT-1の制御下でGFPレポーターを発現するiPS細胞を使用して、標的組織としての下垂体細胞の収集効率を向上させた。Step②：患者由来の抗原特異的キラーT細胞の生成と再活性化のステップ。患者の末梢血からリンパ球を抽出し、マグネテックビーズを用いて制御性T細胞（T-reg）を除去。次に、抗原認識部位であるエピトープの近傍の複数ペプチドでリンパ球を刺激し、特異的キラーT細胞を選別。キラーT細胞の特異的反応を確認した後、IFN-γ ELISpot解析により抗原特異的反応性を確認。さらに、FACS・セルソーターを用いて、T細胞の活性化および細胞傷害指標であるCD137（4-1BB）およびCD107aをマーカーとしてクローン化を行い、細胞障害性の高い候補クローンであるVβ7.1クローンを中心に解析を進めた。Step③：in vitro 再構成疾患モデルの確立と病態解析。ステップ①で生成された患者由来iPS細胞からの下垂体組織と、ステップ②でクローン化された患者由来抗原特異的キラーT細胞を共培養することにより、自己免疫疾患（抗PIT-1下垂体炎）のin vitro疾患モデルの確立に成功した。本年度は、確立されたin vitro再構成モデルを用いて、自己免疫性下垂体疾患の病態解析および創薬スクリーニングを行った。

这项研究应用了人IPS细胞和肿瘤免疫技术来建立一种疾病模型，以阐明自身免疫垂体疾病的病理，该疾病具有很高的未满足医疗需求。此外，我们旨在通过鉴定病因通用机制来开发新的诊断和治疗方法。步骤1：垂体组织是由患者来源的IPS细胞（Strall AP01）以及在靶抗原蛋白PIT-1控制下表达GFP报告基因的IPS细胞产生的，我们提高了垂体细胞作为靶组织的收集效率。步骤2：从患者中生成和重新激活抗原特异性杀伤细胞的步骤。从患者的外周血中提取淋巴细胞，并使用Magnetec珠去除去调节T细胞（T-REGS）。接下来，用表位附近的多个肽（即抗原识别位点）刺激淋巴细胞，并对特定的杀手T细胞进行分类。确认杀伤细胞的特定反应后，通过IFN-γELISPOT分析证实了抗原特异性反应性。此外，使用FACS细胞分选仪，我们克隆了T细胞激活和细胞毒性指标CD137（4-1BB）和CD107A作为标记，并且主要在Vβ7.1克隆（一种高度细胞毒性候选者的克隆）上进行分析。步骤3：建立重建疾病的模型和体外病理分析。通过从步骤1中产生的患者衍生的IPS细胞以及在步骤2中克隆的患者衍生的抗原特异性杀伤T细胞中结合垂体组织，我们成功地建立了一种用于自身免疫性疾病的体外疾病模型（Antipit-1垂体炎）。今年，我们使用已建立的体外重建模型对自身免疫性垂体疾病和药物发现筛查进行了病理分析。

项目成果

期刊论文数量（20）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

自己免疫性下垂体炎の新たな展開　疾患iPS細胞を用いた自己免疫性下垂体疾患のin vitro疾患モデルの樹立

自身免疫性垂体炎研究新进展：利用iPS细胞建立自身免疫性垂体疾病体外疾病模型

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
蟹江慶太郎;伊藤剛;井口元三;松本隆作;浦井伸;坂東弘教;山本雅昭;福岡秀規;小川渉;金子新;高橋裕
通讯作者：
高橋裕

Responsiveness to DDAVP in Cushing’s disease is associated with USP8 mutations through enhancing AVPR1B promoter activity

DOI：
10.1007/s11102-022-01220-4
发表时间：
2022-04
期刊：
Pituitary
影响因子：
3.8
作者：
Hiroki Shichi;H. Fukuoka;Maki Kanzawa;Masaaki Yamamoto;Naoki Yamamoto;Masaki Suzuki;Shin Urai;R. Matsumoto;Keitaro Kanie;Y. Fujita;H. Bando;G. Iguchi;N. Inoshita;S. Yamada;Yutaka Takahashi;Wataru Ogawa
通讯作者：
Hiroki Shichi;H. Fukuoka;Maki Kanzawa;Masaaki Yamamoto;Naoki Yamamoto;Masaki Suzuki;Shin Urai;R. Matsumoto;Keitaro Kanie;Y. Fujita;H. Bando;G. Iguchi;N. Inoshita;S. Yamada;Yutaka Takahashi;Wataru Ogawa

重症筋無力症を合併した抗PIT-1下垂体炎の1例

抗PIT-1垂体炎并发重症肌无力1例