小児の急性致死性脳炎の原因ウイルスに対する治療薬候補のマウスモデルを用いた評価

使用小鼠模型评估针对引起儿童急性致命性脑炎的病毒的候选治疗药物

• 批准号: 21K08502
• 负责人: 伊藤 睦代
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08502/
• 关键词: マウスモデル; ラブドウイルス; 脳炎; 治療薬; 薬剤併用; 相互作用; SCIDマウス; 急性脳炎; 動物モデル; スクリーニング

ラブドウイルス属に属するChandipura virus（CHPV）はインドにおいて小児の急性脳炎のアウトブレイクを起こすことが知られている。その致死率は50-70%と極めて高いが、有効な治療法は確立されていない。これまでに、数種類の薬剤等がin vitroで効果を示すことが報告されているが、in vivoで効果を検証したものはない。本研究ではCHPVに対する効果的な治療法の開発のため、Favipiravirおよび選択された薬剤のin vitro およびin vivoでの薬効評価を行うことを目的としている。昨年度までにドラッグライブラリのスクリーニングによって、CHPVの増殖を抑制する薬剤として選択された4つの薬剤について詳細な解析を行い、NiclosamideとNelfinavirがin vivoで到達可能な濃度以下で高い増殖阻害効果を示すことを明らかにしてきた。そこで、本年度はNiclosamideとNelfinavirについてin vitroでの併用効果を解析した。単剤での効果や細胞毒性の結果から適当な希釈段階を算出した。Niclosamide では0.20～0.05 μM、 Nelfinavir では5.0～1.3 μMの範囲で両薬剤の段階希釈液を作製した。Vero細胞にCHPVをmoi＝0.01で感染させ、薬剤混合液を添加した培養液を加え培養した。２日後に培養上清を回収し、ウイルス力価をプラーク法で測定した。両薬剤の単剤および併用によるウイルス増殖抑制効果についてR及びRStudioを用いて解析を行った。Bliss 独立性モデルにより解析した結果、これら２つの薬剤は幅広い濃度領域において1.1～3.3倍の相乗効果を示すことが明らかとなった。さらにdose モデルによる解析の結果、A = Niclosamide、 B = Nelfinavirとしたとき、αAB = －0.47、αBA = －0.14となり、両薬剤が双方向性に相乗効果を示すことが分かった。

据已知Chandipura病毒（CHPV）是叛徒属的成员，在印度儿童中导致急性脑炎爆发。死亡率在50-70％的情况下极高，但尚未确定有效的治疗方法。迄今为止，据报道，几种类型的药物在体外是有效的，但在体内均未证实它们。这项研究旨在评估Favipiravir和选定药物在体外和体内开发有效治疗CHPV的功效。直到去年，通过筛选药物库，我们对被选为抑制CHPV生长的药物的四种药物进行了详细分析，表明烟酰胺和Nelfinavir在可以在体内达到的浓度下表现出较高的生长抑制作用。因此，今年我们分析了烟酰胺和Nelfinavir在体外的影响。根据单个药物和细胞毒性的影响，计算了适当的稀释步骤。两种药物的系列稀释液均在烟酰胺的0.20至0.05μm的范围内，Nelfinavir稀释为5.0至1.3μm。在MOI = 0.01时用CHPV感染VERO细胞，并加入其中添加的药物混合物。两天后，收集了培养上清液，并通过斑块法确定病毒滴度。使用R和Rstudio分析了两种通过使用单药和组合抑制病毒生长的药物的作用。使用幸福独立模型的分析表明，这两种药物在广泛的浓度范围内表现出1.1至3.3倍的协同作用。此外，使用剂量模型的分析表明，当A =烟酰胺和B = Nelfinavir时，αAB= -0.47和αBA= -0.14，表明两种药物都表现出双向协同作用。

项目成果

Evaluation of a novel severe combined immunodeficiency mouse model for antiviral drug evaluation against Chandipura virus infection

• DOI: 10.1016/j.antiviral.2023.105582
• 发表时间: 2023-03-29
• 期刊: ANTIVIRAL RESEARCH
• 影响因子: 7.6
• 作者: Kitaura，Satoshi;Tobiume，Minoru;Takayama-Ito，Mutsuyo
• 通讯作者: Takayama-Ito，Mutsuyo

2.High-throughput screening of drug compound library identifies antiviral compounds against Chandipura virus in vitro.

2.药物化合物库的高通量筛选在体外鉴定出针对金迪普拉病毒的抗病毒化合物。

• 发表时间: 2021
• 作者: Masayoshi Kusunoki;Ryuichi Ohta;Nozomi Nishikura;Chiaki Sano;北浦 慧，河原円香，佐藤正明，加藤博史，仲山紀子，伊藤（高山）睦代，西條政幸，森屋恭爾
• 通讯作者: 北浦 慧，河原円香，佐藤正明，加藤博史，仲山紀子，伊藤（高山）睦代，西條政幸，森屋恭爾