非定型3q26転座型骨髄性腫瘍のEVI1エピジェネティック制御機構解明と治療応用

阐明EVI1表观遗传调控机制及其在非典型3q26易位骨髓瘤中的治疗应用

• 批准号: 21K08414
• 负责人: 蝶名林 和久
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08414/
• 关键词: 非定型3q26転座型骨髄性腫瘍; EVI1活性化; 転写制御領域; 疾患特異的iPS細胞; BET阻害剤; スーパーエンハンサー

当初の研究計画に沿って、令和４年度に下記の進捗があった。１）次世代シークエンサーを用いた非定型EVI1遺伝子再構成MDS症例のゲノム解析：MDS-iPS細胞が樹立できた非定型EVI1転座陽性MDS症例の骨髄検体のターゲットシークエンスの再解析を行い、PTPN11、ETNK1、EZH2などMDSで高頻度に認められる変異を同定した。２）MDS-iPS細胞を用いた病態再現：１）のMDS患者末梢血保存サンプルから正常T細胞由来iPS（T-iPS）細胞の樹立にも成功した。MDS-iPS、正常T-iPS細胞株を胚様体形成法を用いて造血誘導し、造血前駆細胞（CD34+）、成熟骨髄球系（CD14+）、赤血球系（CD235a+）の割合を検討したところ、正常T-iPS細胞株と比較してMDS-iPS細胞株において有意にCD34陽性率の上昇、CD14及びCD235a陽性率の低下を認め、元の症例で認めた血液成熟障害を反映していると考えられた。また造血前駆細胞分画でソートして、GMCSF、G-CSF、IL3、IL-6、SCF、EPO 存在下でコロニーアッセイを行ったところ、MDS-iPSではコロニー形成能が著明に障害されていたが、正常T-iPS細胞株では異常は認めなかった。３）MDS-iPS細胞の網羅的エンハンサー解析：令和3年度に引き続き、MDS-iPS細胞株及び再分化させた造血前駆細胞のゲノムDNAを材料に、H3K27acのChIP-seqにより網羅的な転写調節領域の解析を行い、造血前駆細胞特異的に活性化しているプロモーター、エンハンサーを同定した。４）スーパーエンハンサーを標的としたEVI1発現抑制：MDS-iPS細胞を用いて、３）で同定された転写制御領域を標的としてBET阻害剤JQ1によるEVI1発現抑制効果を確認し、Annexin Vアッセイで用量依存性のアポトーシス誘導効果を確認した。

根据最初的研究计划，以下进展是Oriwa的第四年。 1）使用下一代序列：可以建立MDS-IPS细胞的非特异性EVI1基因重建MDS病例的基因组分析，重新分析了非特异性EVI1 EVI1阳性MDS病例的骨髓样品的靶序列PTPN11，PTPN11，PTPN11，PTPN11，已经鉴定出在MDS（例如ETNK1和EZH2）中高度认可的MEMARIS。 2）MDS-IPS细胞的状况：1）MDS患者外周血保存样品在建立正常T细胞衍生的IP（T-IPS）细胞方面也成功。 MDS-ips，正常的T-IPS细胞储备诱导造血细胞（CD34+），成熟的骨骼胸膜细胞（CD14+）和红细胞（CD235A+）（CD235A+）（CD235A+）与正常的T-ips细胞库存相比。提高CD34阳性速率，降低CD14和CD235A阳性率，并反映原始情况下识别的血液成熟障碍。此外，当我对造血前体细胞分裂进行排序，并在GMCSF，G-CSF，IL3，IL3，IL3，IL-6，SCF，EPO存在中进行了菌落测定时，MDS-ips中的菌落形成能力受损在正常T-IPS细胞库存中没有异常。 3）MDS-IPS细胞的全面增强子分析：MDS-ips细胞的储备和基因组DNA的共染色造血初步细胞，这些细胞被重新连接为一种材料，并通过H3K27AC chip-seq进行了全面的转换。 ，并且鉴定出了造血前体细胞的增强剂，增强剂已被鉴定出来。 4）靶向超增强剂的EVI1表达抑制：使用MDS-IPS细胞检查BET抑制剂JQ1的EVI1表达抑制作用，该抑制剂JQ1靶向由MDS-IPS细胞鉴定的转录控制区域，并检查Annexin V Assay中的剂量。我们证实了凋亡诱导效应的依赖性。

项目成果

患者由来iPS細胞を用いた非定型3q26転座を有するAMLの病態解明

使用患者来源的 iPS 细胞阐明具有非典型 3q26 易位的 AML 的病理学

• 发表时间: 2021
• 作者: 服部浩一;島津浩;高橋聡;Heissig Beate;中村桃子
• 通讯作者: 中村桃子

リプログラミング技術を用いた骨髄性腫瘍（MDS、AML）研究

使用重编程技术进行骨髓瘤（MDS、AML）研究