DIHS治療薬の合理的開発を志向したHLAの構造学的研究

HLA结构研究旨在合理开发DIHS疗法

• 批准号: 21K08358
• 负责人: 日下部 吉男
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08358/
• 关键词: 薬疹; 構造解析; HLA; 立体構造; アレルギー; DIHS; インシリコ

本研究の目的は、HLA-B*13:01を持つ人がDIHSを引き起こす薬物を服用してもアレルギー反応を起こさないペプチド様医薬品開発の指針を得ることである。そこで本研究ではまず、HLA-B*13:01単独構造およびHLA-B*13:01-アロプリノール複合体、フェノバルビタール複合体の立体構造をX線結晶構造解析の手法を用いて明 らかにすることを目指している。多くのHLAはβ2-Microglobulinとの複合体での立体構造解析が行われているため、本研究に関しても大量のHLA-B*13:01およびβ2-Microglobulinが必要であると考えられる。そこで、HLA-B*13:01およびβ2- Microglobulinの大量発現の最適化条件の検討を行った。HLA-B*13:01に関しては大量培養後、尿素で可溶化し、TALONカラムを用いた金属アフィニティークロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィーの2種類のクロマトグラフィーを行うことでSDS-PAGE上、単一バンドのHLA-B*13:01を得ることに成功した。しかし、未だに精製したβ2-Microgloblinが得られていないので、大量にβ2-Microgloblinを得るために、様々な発現ベクター中にβ2-Microgloblin遺伝子を組み込んだβ2-Mcrogloblin発現ベクターを作成した。大量培養後、TALONカラムを用いた金属アフィニティークロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィーの2種類のクロマトグラフィーを行うことでSDS-PAGE上、単一バンドのβ2-Microglobulinを得ることに成功した。

这项研究的目的是为开发肽样药物的开发提供指导，而当HLA-B*13：01服用引起DIHS的药物时，不会引起过敏反应。因此，在这项研究中，我们旨在首先阐明HLA-B*13：01的三维结构，HLA-B*13：01-丙伯氏素醇复合物以及使用X射线晶体结构分析技术的苯巴尔图醇复合物。由于许多HLA已在与β2-微球蛋白的复合物中进行构象分析，因此认为这项研究也需要大量HLA-B*13：01和β2-微球蛋白。因此，我们研究了HLA-B*13：01和β2-微球蛋白的大表达的优化条件。 HLA-B*13：01在很大程度上进行了培养，然后用尿素溶解，然后进行两种类型的色谱：使用Talon柱和凝胶过滤色谱法和HLA-B*13：01的单个频带在SDS-PAGE上成功获得。然而，由于尚未获得纯化的β2-微蛋白酶，为了获得大量的β2-微蛋白酶，创建了β2-蛋白酶表达载体，其中将β2-神经蛋白基因掺入各种表达量中。大规模培养后，进行了两种类型的色谱法，包括使用Talon柱和凝胶过滤色谱法的金属亲和色谱法，并在SDS-PAGE上成功获得了单个β2-微球蛋白的单个带。