肺炎・肺線維症におけるミトコンドリア DNAダメージ関連分子パターンの機能解析

肺炎和肺纤维化中线粒体DNA损伤相关分子模式的功能分析

基本信息

批准号：
21K08146
负责人：
奥村俊介
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Asahikawa Medical College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08146/
关键词：
ミトコンドリアDNA 肺炎間質性肺炎肺線維症

项目摘要

臨床研究では、間質性肺炎および肺線維症の患者における血中ミトコンドリアDNAのコピー数の比較を行った。ミトコンドリアDNAコピー数を測定する際、高感度にミトコンドリアDNAの定量を行えるようDigital PCR法による測定法を開発した。間質性肺炎については、患者を慢性進行性の間質性肺炎・肺線維症と、非進行性の間質性肺炎・肺線維症の患者に分けて解析を行った。慢性進行性の間質性肺炎患者と非進行性の間質性肺炎の患者で血中ミトコンドリアDNAのコピー数の比較を行ったが、両群で明らかな差を認めなかった。さらに全間質性肺炎・肺線維症患者の血中ミトコンドリアDNAコピー数を、血中SP-D、血中KL-6、%FVC、%DLCOの各所見と比較したところ、いずれの所見についても血中ミトコンドリアDNAコピー数との相関を認めなかった。これら結果について、血液中のミトコンドリアDNAコピー数が、慢性期の間質性肺炎・肺線維症の病態以外の影響を受け、疾患特異性や臓器特異性に問題があると考察した。我々は疾患特異性や臓器特異性の問題を解決するため、患者の血液サンプルではなく、呼気凝縮液のサンプルを採取し、呼気凝縮液中のミトコンドリアDNAのコピー数を検証する実験を行うこととした。このため、呼気凝縮液サンプルからDNAを抽出してミトコンドリアDNAをDigital PCR法で測定する新たな測定法を開発した。この測定法により、健常者から採取した呼気凝縮液中のミトコンドリアDNAコピー数を高感度に測定できることができるようになった。

在一项临床研究中，我们比较了间质性肺炎和肺纤维化患者的循环线粒体 DNA 拷贝数。在测量线粒体DNA拷贝数时，我们开发了一种使用数字PCR方法来高灵敏度定量线粒体DNA的测量方法。对于间质性肺炎，我们将患者分为慢性进行性间质性肺炎/肺纤维化患者和非进行性间质性肺炎/肺纤维化患者。我们比较了慢性进行性间质性肺炎患者和非进行性间质性肺炎患者血液中线粒体DNA的拷贝数，发现两组之间没有明显差异。此外，我们将全间质性肺炎和肺纤维化患者血液中线粒体DNA拷贝数与血液SP-D、血液KL-6、%FVC和%DLCO的结果进行比较，未观察到与血液线粒体的相关性。 DNA 拷贝数。对于这些结果，我们认为血液中的线粒体DNA拷贝数受到慢性期间质性肺炎和肺纤维化以外的疾病的影响，并且存在疾病特异性和器官特异性的问题。为了解决疾病特异性和器官特异性的问题，我们收集了患者的呼出气冷凝物样本而不是血液样本，并进行了实验来验证呼出气冷凝物中线粒体DNA的拷贝数。为此，我们开发了一种新的测量方法，从呼出气冷凝液样本中提取 DNA，并使用数字 PCR 测量线粒体 DNA。这种测量方法可以高灵敏度地测量从健康个体收集的呼出气体冷凝液中的线粒体 DNA 拷贝数。