急性骨髄性白血病のエクソン・スキップ治療に向けた基盤的研究

外显子跳跃治疗急性髓系白血病的基础研究

• 批准号: 21K07218
• 负责人: 坂下 暁介
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Shimane University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07218/
• 关键词: 急性骨髄性白血病; エクソンスキップ

NPM1.3のスプライシングに携わる領域を同定しNPM1.3の選択率を上昇させる方法論の確立を目指した。NPM1ゲノムのうちExon7-Exon12 (約12kb)をクローニングし、mini geneベクターを作製した。このmini geneをヒト由来の293T細胞に導入すると、NPM1.1とNPM1.3の両方が発現した。mini geneから発現したNPM1.1とNPM1.3の比率（NPM比）を内在性NPM1のNPM比と比較すると、mini geneにおいてNPM1.3の選択率がやや低かったことから、NPM1.3の選択には今回クローニングしたExon7-Exon12の領域以外も関与する可能性が考えられた。しかしながら、ヒトNPM1ゲノムの全長は23kbに及ぶため、遺伝子導入効率の観点から、mini geneのサイズをこれ以上大きくするのは現実的ではないと考えた。そこで、クローニングしたExon7-Exon12の範囲内においてNPM1.3の選択に関与する領域を検討した。その結果、intron7とintron8のいずれかを欠損したmini geneではNPM1.3の選択効率の低下が見られ、intron7とintron8を両方欠損するとさらに低下することが明らかとなった。次にintron7 (約700bp)をいくつかにセクションに分割し、セクションごとに欠損させて、NPｍ1.3の選択効率への影響を検討したが、コントロールとの差は認められなかった。一方、Exon10を同様のアプローチでいくつかのセクションに分割したところ、欠損することによってNPM1.3の選択効率が上昇する領域を同定した。よってこの領域は、通常NPM1.3の選択に対して抑制的に作用するものの、欠損することによって抑制が解除されたと考えられる。

目的是建立一种方法来识别NPM1.3剪接涉及的区域并提高NPM1.3的选择率。在NPM1基因组中，exon7-exon12（约12KB）被克隆以创建一个迷你基因载体。当将该微型基因引入人类293T细胞中时，表达了NPM1.1和NPM1.3。与通过迷你基因表达的NPM1.1和NPM1.3（NPM比）的NPM比相比，在迷你基因中，NPM1.3的选择略低。这次克隆的exon7-exon12。但是，由于人类NPM1基因组的总长度为23Kb，因此从基因引入效率的角度增加了迷你基因的大小是不现实的。因此，我们检查了克隆Exon7-Exon12中选择NPM1.3的区域。结果，缺乏内含子7和内含子8的迷你基因的NPM1.3选择效率降低，这很明显，Intron7和Intron8均将进一步降低。接下来，Intron7（约700 bp）分为几个部分，缺少每个部分，并检查了NPM1.3的选择效率的影响，但没有观察到对照组的差异。另一方面，当Exon10以类似方法分为几个部分时，由于损失，NPM1.3的缺失效率增加了。因此，尽管该区域通常被抑制为NPM1.3的选择，但认为由于损失而取消了抑制性。