骨肉腫の腫瘍免疫誘導制御に関わる分子機構解明と新規がん免疫療法の開発

阐明骨肉瘤中肿瘤免疫诱导和控制的分子机制并开发新的癌症免疫疗法

基本信息

批准号：
21K07134
负责人：
清水孝恒
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Hoshi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07134/
关键词：
骨肉腫腫瘍免疫転移巣がん微小環境血管新生

项目摘要

昨年度に続きdropout screeningから抽出された遺伝子に関し、骨肉腫細胞にshRNAによるノックダウンを行い、C57BL/6（B6）と免疫不全のC57BL/6 SCID（B6scid）マウスに移植し、腫瘍形成能の比較を行った。昨年度検証した遺伝子はいずれも、B6とB6scid間でみられる腫瘍形成の差は小さかった。そこで、検証する遺伝子の幅を広げ、候補遺伝子の上位に位置するのミトコンドリア内の電位依存性アニオンチャネル及び、ATP依存性プロテアーゼに関し評価を行った。しかし、腫瘍形成への影響は見られなかった。現在、抽出法の改良と評価を行うタイミングの検討を行っている。抽出された遺伝子群は、過去の報告からp53と関連が示唆された。そこで、AXT細胞でみられる変異p53の腫瘍免疫への関与を解析した。変異は一塩基置換によりアミノ酸置換R270Cがおこっていた。変異p53をCRISPR-Cas9によりノックアウト（KO）し、親株AXT細胞と変異p53をノックアウトした細胞をB6マウスに移植した結果、KO細胞由来の骨肉腫は親株由来に比較して小さかった。一方で、B6scidマウスに移植した結果と比較すると、親株由来の腫瘍重量を1として、KO細胞では1.5から4倍大きな腫瘍の形成がみられた。即ち、変異p53は、腫瘍免疫を抑制する可能性が示唆されたが、検討中である。一方、変異p53は細胞増殖を促進したが、浸潤、in vivoにおける転移能には影響を与えなかった。変異p53は野生型が有する転写活性を示さなかった。ChIP assayの結果、変異p53はDNAには結合するものの、DNA傷害時に転写活性に必要とされる結合部位には野生型p53と比較して結合量が少ないことが明らかとなった。以上の変異p53の生物学的意味、分子機構に関する知見は海外誌に発表した。

继去年之后，用shRNA敲低骨肉瘤细胞中脱落筛选中提取的基因，移植到C57BL/6（B6）和免疫缺陷的C57BL/6 SCID（B6scid）小鼠中，并比较了肿瘤形成能力。。对于去年测试的所有基因，B6 和 B6scid 之间的肿瘤形成差异很小。因此，我们扩大了待测试基因的范围，并评估了位于候选基因上方的线粒体电压依赖性阴离子通道和ATP依赖性蛋白酶。然而，没有观察到对肿瘤形成的影响。我们目前正在考虑改进和评估提取方法的时机。之前的报道表明提取的基因组与p53有关。因此，我们分析了 AXT 细胞中发现的突变 p53 在肿瘤免疫中的作用。该突变是由单核苷酸取代引起的，导致氨基酸取代 R270C。使用CRISPR-Cas9敲除突变的p53，并将亲本AXT细胞系和突变的p53敲除细胞移植到B6小鼠体内，结果，源自KO细胞的骨肉瘤比源自亲本品系的骨肉瘤更小。。另一方面，与移植到 B6scid 小鼠的结果相比，假定来自亲代细胞系的肿瘤重量为 1，KO 细胞形成的肿瘤大 1.5 至 4 倍。换句话说，有人认为突变的p53可能会抑制肿瘤免疫，但这目前正在研究中。另一方面，突变的p53促进细胞增殖，但不影响体内侵袭或转移能力。突变体p53不表现出野生型所具有的转录活性。 ChIP 测定结果显示，虽然突变型 p53 与 DNA 结合，但与野生型 p53 相比，它与 DNA 损伤时转录活性所需的结合位点的结合较少。上述关于p53突变体的生物学意义和分子机制的研究成果发表在海外期刊上。