消化管の薬物吸収を制御する新規促進拡散型オリゴペプチドトランスポーターの分子同定

控制胃肠道药物吸收的新型促进扩散寡肽转运蛋白的分子鉴定

基本信息

批准号：
21K06694
负责人：
樋口慧
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度は、申請者が見出した新規オリゴペプチドトランスポーター(EOPT1)およびアイソフォームの基質認識性を明らかにすることおよびその発現プロファイルについて、検討することを計画していた。EOPT1の基質認識性について、EOPT1が内因性オリゴペプチドだけでなく、B-ラクタム系抗生物質を輸送しうることを見出すことに成功した。これは、消化管における既知の管腔膜側の取り込みトランスポーターPEPT1のカウンターパートの性質として働きうることを示す重要な知見であると考えられる。またEOPT1のアイソフォームの解析より、新たなオリゴぺチドトランスポーター（EOPT2）を見出すことに成功した。このEOPT2の基質認識性の解析の結果、EOPT2は一部のオリゴペプチドを認識しうること、加えて薬物一部を輸送できることを発見した。現在他のEOPTアイソフォームの中に、ペプチドを認識できるものがないかについて、検討を進めている。EOPT1のmRNA発現解析を行った結果、ラット消化管各部およびヒト小腸上部とCaco-2細胞において、発現が確認された。その発現量は、ラット消化管各部で大きな差は観察されなかった。同様にEOPT2もヒト小腸上部とCaco-2細胞に発現が確認された。次にタンパク質発現を確認するために、免疫染色およびWestern blotを試みた。しかし特異性低く、発現および局在の評価ができなかった。そこで消化管上皮細胞での局在性を明らかにするために、EGFP融合EOPTsの発現Caco-2にて局在を評価したところ、EOPT1、EOPT2ともに、同細胞の基底膜に主に発現していた。現在EOPT1、およびEOPT2抗体作成を含めて、内因性タンパク質発現評価の計画を検討している。

今年，申请人计划揭示新的寡肽转运蛋白（EOPT1）以及对同工型及其表达谱的底物识别。关于EOPT1的底物识别，我们成功地发现EOPT1不仅可以运输内源性寡肽，而且可以运输B-乳腺癌抗生素。这被认为是一个重要发现，可以作为消化道中已知管膜侧的转运蛋白PEPT1计数器的本质。此外，我们成功地从EOPT1的同工型分析中找到了新的Oligo CHID运输（EOPT2）。由于对EOPT2的底物识别分析的结果，EOPT2发现可以识别一些寡肽，并且可以运输一些药物。我们目前正在研究是否还有其他EOPT同工型可以识别肽。由于EOPT1的mRNA表达分析，在大鼠消化道和人类小肠和CACO-2细胞的上部证实了表达。在大鼠消化道的每个部分未观察到表达量。同样，在人类小肠和CACO-2细胞的上部也证实了EOPT2。接下来，我们尝试了免疫染色和蛋白质印迹来确认蛋白质表达。但是，它是低特异性的，无法通过表达和定位来评估。因此，为了阐明胃肠道上皮细胞的定位，在CACO-2中评估了EGFP融合EOPT的定位，并且EOPT1和EOPT2都在同一细胞的基础上表达。目前，我们正在考虑计划评估内源性蛋白表达，包括EOPT1和EOPT2抗体的创造。