エンドサイトーシス経路を基軸とした細胞内輸送経路の解明

基于内吞途径阐明细胞内转运途径

基本信息

批准号：
21K06087
负责人：
十島純子
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tokyo University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本年度は以下の研究を実施した。（1）クラスリン小胞の初期エンドソームへの融合機構の解明、についてはラパマイシン誘導ヘテロ二量化を用いたPan1pの異所性発現の影響について実験を進めた。本年度の研究ではアクチン活性化因子や脱重合因子もPan1繋留部位に順番にリクルートされ、ここでエンドサイトーシス過程の後期過程が再現されることを明らかにした。さらに、クラスリン小胞のエンドソームへの輸送に必要なアクチンケーブルもPan1繋留部位に繋留されることを明らかにした。(2) ゴルジ体由来小胞とエンドソームの融合機構、についてはゴルジ体からの輸送経路を遮断した際のクラスリン小胞-エンドソーム間の融合に与える影響について、クラスリンアダプタータンパク質であるGGA2の機能ドメインを部分的に欠損する変異体を作成し、エンドサイトーシス経路の輸送への影響を調べた。その結果、他のクラスリンアダプタータンパク質との結合を仲介するGAEドメイン欠損体では、野生型や他のドメイン欠損体と比べて顕著なエンドサイトーシスの異常が見られた。また、リサイクル経路のマーカーであるSnc1p(R-SNARE)の局在を詳細に調べたところ、蛍光α-factorと同様にトランスゴルジ網内のTlg2pが局在する区画と共局在することが分かった。さらに、GGAs欠損体ではSnc1pはTlg2pと共にSec7pとは異なる部位に蓄積することが分かった。(３)エンドソームにおける積荷の分解とリサイクリングの選別機構、については脂質膜成分であるフォスファチジルセリン（PS）合成酵素の欠損体（cho1Δ）の解析を行った。その結果、cho1ΔではPSが著しく低下し蛍光α-factorの取り込み低下が見られた。これはα-factorの受容体であるSte2pの細胞膜局在の低下が原因であることを明らかにした。

今年，进行了以下研究：（1）使用雷帕霉素诱导的网状蛋白囊泡的异二二聚态化对PAN1P异位表达的作用的实验研究。今年的研究表明，肌动蛋白激活剂和解聚因子还按顺序募集到PAN1绑定部位，在该地点后来重现了内吞作用过程的后期过程。此外，我们透露，在PAN1系列部位将网格蛋白囊泡运输到内体所需的肌动蛋白电缆也被束缚。 (2) Regarding the mechanism of fusion between Golgi-derived vesicles and endosomes, we investigated the effect of blocking the transport pathway from the Golgi on fusion between clathrin vesicles and endosomes, mutants that partially lack the functional domain of GGA2, a clathrin adaptor protein, and investigated the effect on transport of the endocytotic pathway.结果，与野生型和其他域缺陷相比，介导与其他网状蛋白衔接蛋白结合的GAE结构域缺陷显示出明显的内吞作用异常。此外，当我们研究了回收途径的标志物SNC1P（R-SNARE）的定位时，发现像荧光α因子一样，TLG2P与TLG2P的隔室进行了共定位。此外，发现在GGA缺乏的GGA中，SNC1P在不同的位点积聚了Sec7p的TLG2P。（3）分析了内体中货物和回收利用的机理，分析了磷脂酰丝氨酸（PS）合酶的缺陷（CHO1Δ），这是脂质膜成分。结果，CHO1δ的PS显着降低，并观察到荧光α因子的摄取。这表明这是由于Ste2p的细胞膜定位降低，Ste2p是α因子的受体。