イヌ膀胱癌のトリプトファン代謝異常を標的とした新たな腫瘍免疫療法の確立

针对犬膀胱癌色氨酸代谢异常的新型肿瘤免疫疗法的建立

• 批准号: 21J13910
• 负责人: 池田 凡子
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-28 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21J13910/
• 关键词: IDO1; イヌ; 膀胱癌; 抗腫瘍免疫

実験1ではBRAF変異によるPGE2の産生亢進を介したIDO1発現経路を検証するために,イヌ膀胱癌細胞株3株を用いて, PGE2経路におけるPGE2受容体阻害抗体によって阻害した. その結果, 有意にIDO1遺伝子の発現が低下することが明らかになった. 実験2ではイヌ膀胱癌細胞株が高発現するIDO1によるイヌ免疫細胞への作用を検証するために, イヌ膀胱癌細胞株とイヌT細胞を共培養し, IDO1阻害剤 (Epacadostat) を添加した.　その結果, TGF-α/IFN-γの遺伝子発現が有意に上昇し, 細胞傷害性T細胞の細胞数も有意に増加した.　実験3では実験2で実証されたIDO1による抗腫瘍免疫増強作用のin vivo抗腫瘍効果を検証するために, NOGマウスに, イヌ免疫細胞を移植し, イヌ化マウスを作製した. 作製したイヌ化マウスにイヌ膀胱癌細胞株を皮下移植して, 担癌マウスモデルを作製し, IDO1阻害剤 (Epacadostat) を投与した. その結果, 投与群はcontrol群に比べて, 有意に腫瘍径が減少した. さらに, 採材した腫瘍組織に浸潤する免疫細胞を解析するため, CD8 およびFoxp3のIHCを実施した.その結果, Epacadostat投与群はcontrol群に比べて, 有意にCD8陽性細胞が増加し, 有意にFoxp3陽性細胞が低下した.　実験4では実験3によりin vivo抗腫瘍効果が実証され, 正常犬1頭を用いた安全性試験にて重大な副作用が発生しなかったため, イヌ膀胱癌に罹患した対象症例に対し, Epacadostat投与を行う臨床試験を実施した. 現在3頭が臨床試験に参加しており, 一般臨床検査で副作用は認められていない. 超音波検査により投与後の腫瘍径の変化を評価したところ, １頭がPR, 残り2頭が縮小傾向のSDである.

在实验1中，为了验证由于BRAF突变导致的PGE2产生增加所介导的IDO1表达途径，我们使用了三种狗膀胱癌细胞系，并用PGE2受体阻断抗体抑制了PGE2途径，结果揭示了IDO1的表达。实验2中，为了验证在狗膀胱癌细胞系中高表达的IDO1对狗免疫细胞的影响，将犬膀胱癌细胞系与犬T细胞共培养，并添加IDO1抑制剂（Epacadostat），结果TGF-α/IFN-γ的基因表达显着增加，细胞毒性T细胞的数量也显着增加。实验3中，为了验证实验2中展示的IDO1的抗肿瘤免疫增强作用的体内抗肿瘤效果，将犬免疫细胞移植到NOG小鼠中。产生犬化小鼠，将犬膀胱癌细胞系皮下移植到所产生的犬化小鼠体内，建立荷瘤小鼠模型，并给予IDO1抑制剂（Epacadostat），结果，治疗组为对照组。此外，为了分析浸润肿瘤组织样本的免疫细胞，对CD8和Foxp3进行了IHC。结果显示，与对照组相比，Epacadostat给药组CD8阳性细胞显着增加，Foxp3阳性细胞显着减少。在实验4中，与实验3一样，证明了体内抗肿瘤作用，一只正常狗。由于安全性测试中没有出现严重副作用，我们针对犬膀胱癌开展了一项临床试验，目前有三只狗正在参与该临床试验。一般临床试验中未观察到副作用，通过超声检查评估给药后肿瘤直径的变化，一只狗处于PR，其余两只处于SD，有缩小的趋势。