Struktur und Dynamik des Kernporenkomplex in lebenden Zellen

活细胞核孔复合体的结构和动力学

• 批准号: 163432739
• 负责人: Professor Dr. Achilleas Frangakis
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Biophysik
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2009-12-31 至 2012-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/163432739?language=en
• 关键词: Struktur; und; Dynamik; des; Kernporenkomplex

Kernporenkomplexe sind Strukturen in der den Zellkern umgebenden Doppelmembran, der Kernhülle. Sie fungieren als „Tore“ für Proteine und RNA-Moleküle. Der Kernporenkomplex erfährt eine immense Reorganisation während der Mitose, deren genauer Ablauf noch nicht vollständig aufgeklärt ist, da es bisher nicht gelungen ist diesen Prozess unter hochauflösenden Bedingungen zu beobachten. In diesem Projekt wollen wir die Formation des Kernporenkomplexes zu bestimmten Zeitpunkten in der späten Phase der Mitose unter quasi-nativen Bedingungen mittels konventioneller und cryo Elektronentomographie vitrifizierter Sektionen und anschließender Einzelpartikelanalyse untersuchen. Wir haben eine Methode entwickelt, um fluoreszenzmarkierte Nucleoporine, die Bausteine der Kernporenkomplexe, in hochdruckgefrorenen Proben zu lokalisieren. Somit ist es möglich den genauen Entwicklungszeitpunkt der Pore zu bestimmen und diesen mit seiner im Elektrotomogram sichtbaren makromolekularen Struktur zu korrelieren. Die Zeitrafferanalyse ermöglicht es, hochauflösende 3D-Daten der verschiedenen Reorganisationsphasen zu bekommen und so die Dynamik des Kernporenkomplexes auf molekularem Level zu analysieren. Durch diese in silico Reinigung und die Mittelung hunderter Kernporenkomplexe sollten wir ein dreidimensionales Bild erhalten, das eine Auflösung hat bei der die einzelnen Nucleoporine und ihre Dynamic sichtbar ist. Letztendlich werden wir beispiellose Einblicke in die Struktur und Dynamik der Formation des Kernporenkomplexes erhalten.

Sie Fungieren Als“ Tore”蛋白和RNA-Moleküle。重组重组是重组的地方，Ablauf Noch Nicht是最好的去处，而Beddingungen是Prozesses的最佳场所。在Zeitpunkten中最佳需求的最佳方法中，有线电线的衍生物不及格，未定位的Bedingungen Mittels Konventioneller und Cryo Elektronentimographie vitrizographie vitrizierters sektionen undanschließenderßenderßenderßenderßenderβenderepartikelpartikelanaryseuntersuchen。 Wir Haben Eine方法Entwickelt，Um fluoreszenzmarkier核苷，Die Bausteine der Kernporenkomplexe，Hochdruckgefrorenen proben proben Zu lokalisieren。 somit istesmöglichden genauen entwicklungszeitpunkt der pore zu bestimmen und diesen mit seiner im elektrotommongrogy sichtbaren sichtbaren makromolekollomolekularen struktur zu korrelieren。 ZeitrafferanalyseErmöglichtES，Hochauflösende3D-Daten der verschiedenen重组Zu Bekommen und zu bekommen和die dynamik dynectik dynectik desnporenkomplexes auf molekularem级别zu aalysieren。 Durch Durch diese在硅硅和Die Die Mittelung Hunderer kernporenkomplexes sollten wir ein ein dreidimensionales bild erhalten，das eineauflösung帽子bei die die einzelnen einzelnen nucleoporine nucleoporine und ihre ihre ihre dynamic dynamic sichtbar ist ist ist ist。 letztendlich werden wir beispiellose einblicke in die struktur und dynamik dy dynigik dy dynik dy dy beernporenkomplexes erhalten。

项目成果

Correlative light- and electron microscopy with chemical tags.

• DOI: 10.1016/j.jsb.2014.03.018
• 发表时间: 2014-05
• 期刊: Journal of structural biology
• 影响因子: 3
• 作者: Perkovic M;Kunz M;Endesfelder U;Bunse S;Wigge C;Yu Z;Hodirnau VV;Scheffer MP;Seybert A;Malkusch S;Schuman EM;Heilemann M;Frangakis AS
• 通讯作者: Frangakis AS