小分子多肽调控非吞噬细胞内自噬影响胞内化脓性链球菌存活的实验研究

Autophagy functions as an intrinsic defense system to eliminate bacteria that invade host cells. However, the detailed mechanisms underlying how pathogens trigger autophagy in nonphagocytic cells remain unclear. To gain a better insight into the interaction between autophagy and virulence factors of Streptococcus pyogenes (group A streptococcus,GAS) in nonphagocytic cells, we first investigate whether or not different clinical strains could induce autophagy in nonphagocytic cells; simultaneously analyze numbers and areas of GAS-containing LC3-positive autophagosome-like vacuoles (GcAV) triggered by pathogens. Furthermore, we employ new autophagy-inducing peptides (anti-cFLIP peptide and Tat-Beclin 1) induce autophagy in cells invaded by GAS, to examine numbers of GcAV in vivo, and subsequently evaluate bacteria viability after treatment of peptides. In a nutshell, this research project firstly aims to unravel the interplay between cellular autophagy and virulence factors of GAS, and to investigate whether or not autophagy-inducing peptides mediated autophagy is a new antibacterial strategy, finally to develop a research platform linking autophagy and other intercellular bacteria.

自噬是细胞清除细菌入侵的一个重要免疫防御机制。目前，自噬与胞内细菌感染的关系尚处于初步研究阶段，本课题以化脓性链球菌侵入非吞噬细胞为切入点揭示不同毒力的化脓性链球菌与非吞噬细胞内自噬的关系。通过建立化脓性链球菌感染细胞的模型，探讨新型自噬诱导剂即小分子多肽上调细胞内或动物机体内自噬后对侵入性的化脓性链球菌活力的影响。本课题的目标是初步建立一个研究细菌复制、逃逸与宿主细胞相互作用的平台，探索通过调控自噬以预防、控制和治疗化脓性链球菌及其他难治性胞内细菌感染的抗菌新策略。

自噬是细胞清除细菌入侵的一个重要免疫防御机制。目前，自噬与胞内细菌感染的关系尚处于初步研究阶段，本课题以化脓性链球菌和小菌落变异株（SCVs）为研究对象，旨在研究胞内细菌与非吞噬细胞内自噬之间的关系，希望能够通过调控胞内自噬来影响细菌存活。本文通过建立化脓性链球菌和金黄色葡萄球菌小菌落突变株感染细胞的模型，探讨新型自噬诱导剂即小分子多肽上调细胞内或动物机体内自噬后对侵入性胞内菌活力的影响。第一部分研究证明化脓性链球菌在MEF和HeLa两种细胞模型里均可以引起自噬，多种方法证实自噬负调控有利于化脓性链球菌的存活，抗FLIP(cFLIP)肽段和Tat-Beclin-1肽段均显著提高化脓性链球菌感染细胞内的自噬水平，进而显著的降低化脓性链球菌的活力，结果具有统计学差异。在第二部分研究中以金黄色葡萄球菌SCVs为主要研究对象，与野生株相比较，其生长缓慢、菌落细小、溶血环不明显、凝固酶活性下降，传统生化方法不易鉴定，补偿试验鉴定其对胸腺嘧啶和血红素有依赖性。研究证明相较于野生株，SCV1、SCV2引起BMDC细胞自噬的比例更低，说明SCVs在一定程度上抑制了细胞自噬，从而逃逸细胞免疫，得以在细胞内长期存活。cFLIP和Tat-Beclin-1两种小分子肽均通过上调自噬从而降低SCVs的胞内存活率，结果具有统计学差异。本课题已初步建立了一个研究细菌复制、逃逸与宿主细胞相互作用的平台，为进一步研究通过调控自噬作为控制和治疗化脓性链球菌及其他难治性胞内细菌感染的抗菌新策略奠定了基础。

内容获取失败，请点击重试