单链抗体在大肠杆菌体内定点糖基化及通过糖链以共价键定向固定的研究

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项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    31070822
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    35.0万
  • 负责人：
    胡学军
  • 依托单位：
    大连大学
  • 学科分类：
    C0801.固有免疫
  • 结题年份：
    2013
  • 批准年份：
    2010
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2011-01-01 至2013-12-31

项目摘要

以共价键、高密度、定向固定抗体是提高免疫传感器敏感度及延长使用寿命的关键环节。单链抗体的应用，可大幅度提高单位面积固定抗体的密度。近来，我们应用空肠弯曲菌来源的pgl 基因簇，首次成功地在大肠杆菌中定点糖基化单链抗体，并保持原有生物活性。通过氧化糖链形成的醛基，可实现以共价键定向固定抗体在含有氨基的固体材料表面。本项目拟以抗软骨藻酸单链抗体为模型，从以下三方面进行研究：⑴研究不同糖基化位点修饰单链抗体对其生物活性和理化性质影响，提高糖基化后单链抗体理化性能；(2)优化大肠杆菌体内糖基化单链抗体条件，提高单链抗体糖基化效率；（3）研究不同位点糖基化单链抗体对以共价键定向固定单链抗体的影响，优化适合定向固定的糖基化位点。通过细致、深入研究单链抗体糖基化及其定向固定的研究，将提供高效生产理化性质稳定、适于以共价定向固定的单链抗体新途径，为进一步研发高敏感及高稳定的免疫传感器奠定基础。

结项摘要

本课题组应用空肠弯曲菌来源的pgl 基因簇，成功地在大肠杆菌中定点糖基化抗贝类毒素单链抗体2H12和抗荧光素单链抗体4M5.3。结果显示，在合适位点糖基化单链抗体并不影响单链抗体活性。本项目⑴系统研究了不同糖基化位点修饰单链抗体对其生物活性和理化性质影响；(2)优化了大肠杆菌体内糖基化单链抗体条件，提高单链抗体糖基化效率；（3）研究了不同位点糖基化单链抗体对以共价键定向固定单链抗体的影响，优化了适合定向固定的糖基化位点。（4）并围绕以上工作建立了低分子量、低相变温度的类弹性蛋白纯化系统。通过细致、深入研究单链抗体糖基化及其定向固定的研究，通过氧化糖链形成的醛基，实现了以共价键定向固定单链抗体抗体在含有氨基的固体材料表面，为进一步研发高敏感及高稳定的免疫传感器奠定基础。

项目成果

期刊论文数量（6）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
Covalent and Oriented Immobilization of scFv Antibody Fragments via an Engineered Glycan Moiety
通过工程聚糖部分共价定向固定 scFv 抗体片段
  • DOI：
    10.1021/bm301518p
  • 发表时间：
    2013-01-01
  • 期刊：
    BIOMACROMOLECULES
  • 影响因子：
    6.2
  • 作者：
    Hu, Xuejun;Hortiguela, Maria J.;Wall, J. Gerard
  • 通讯作者：
    Wall, J. Gerard
聚乙二醇对ELP[I]_(40)相变温度的影响
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    中国生物工程杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    林衡;李军明;葛高顺;张立超;孙利慧;胡学军
  • 通讯作者：
    胡学军
类弹性蛋白标签在重组蛋白分离纯化中的应用
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    生物技术通报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    林衡;许崇波;孙利慧;胡学军
  • 通讯作者：
    胡学军
ELP[I]50标签在重组硫氧还蛋白分离纯化中的应用及 PEG 对其相变温度的影响
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    微生物学通报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    葛高顺;张立超;李军明;胡学军
  • 通讯作者：
    胡学军
连接肽对融合蛋白ELP[I]_(30)-linker-eGFP相变的影响
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    生命科学研究
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    张立超;李军明;葛高顺;孔令岭;胡学军
  • 通讯作者：
    胡学军

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其他文献

自组装ELP多肽的从头设计及其在生物医药领域中的应用进展
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  • 期刊：
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  • 作者：
    杨国新;侯佳男;胡学军;杨君
  • 通讯作者：
    杨君
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红车轴草
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  • 通讯作者：
    胡学军
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  • 发表时间：
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  • 影响因子：
    --
  • 作者：
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    曲鹏
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    --
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  • 期刊：
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  • 作者：
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  • 通讯作者：
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香砂六君子汤加减治疗功能性消化不良的Meta分析
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  • 期刊：
    中医药导报
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  • 作者：
    何桂花;钟子劭;胡学军;黄穗平
  • 通讯作者：
    黄穗平

其他文献

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胡学军的其他基金

N-糖基化修饰基因工程抗体大肠埃希菌底盘细胞构建
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    面上项目

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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