良性前列腺增生组织中T细胞调控的microRNA在RNA水平调节雄激素受体（AR）的机制研究。

Benign prostatic hyperplasia (BPH) is a common disease in aging men. Androgen inhibitor - 5α reductase inhibitor is the primary mean for BPH treatment, but there are still a large number of patients showed no effect and need to be surgery. The reason is that the androgen receptor (AR) is still activated in the prostate tissue at low androgen levels, but the mechanism of AR activation is not clear. Our early studies have shown that more T cells infiltration in prostate tissue in the drug treatment ineffective patients, while T cells could secrete cytokines CCL5 to promote prostate epithelial cell proliferation and up-regulate AR expression. It is suggested that T cells and CCL5 can activate the AR signal pathway through the "testosterone-independent" mechanism. It is hypothesized that T cells regulate downstream microRNAs by secreting CCL5 and regulate AR expression in prostate epithelial cells at post-transcriptional levels. In this study, we will select T cells to regulate AR-related microRNAs in vitro and validate them in clinical specimens and animal models to obtain a key gene target for interventional BPH.

良性前列腺增生(BPH)是老年男性常见疾病，雄激素抑制剂——5α 还原酶抑制剂是临床治疗 BPH 的主要手段，但仍有很大一部分患者药物疗效不佳需手术。其治疗效果不佳的原因之一，与在低雄激素水平下，前列腺组织内雄激素受体（AR）仍被激活有关，但目前AR被激活的具体机制尚不明确。我们前期研究发现：服用雄激素抑制剂疗效不佳，仍行手术的 BPH 患者的前列腺组织中 T 细胞浸润显著增加；同时T细胞能分泌细胞因子CCL5促进前列腺上皮细胞增殖，并上调AR的表达。提示T细胞及其分泌的CCL5可以通过“睾酮非依赖”机制激活前列腺上皮细胞AR信号通路，从而促进BPH的进展。故假设：T细胞通过分泌CCL5调控下游microRNA，在转录后层面调节前列腺上皮细胞内AR的表达。本课题拟体外筛选出T 细胞调控AR 相关的microRNA，并在临床标本和动物模型中验证，从而获取可干预的调节 BPH的关键基因靶点。

良性前列腺增生（Benign prostatic hyperplasia，BPH）是老年男性最常见的泌尿系统疾病之一，严重影响了老年男性的生活质量。雄激素受体（Androgen receptor，AR）介导的信号通路在BPH的进展中起着非常重要的作用。在BPH中，既往有研究发现BPH患者组织标本中免疫炎症浸润与AR的表达成负相关，并直接在体内证明上皮细胞AR的减少能够引起前列腺炎症浸润。但免疫炎症细胞对AR信号通路是否存在作用，存在何种作用机制尚有争议，亟待解决。.基于此，我们拟用前列增生细胞株RWPE-1，BPH-1-AR与两种CD4+ T细胞系Molt-3和HH细胞共培养，采取免疫组化、细胞共培养实验、CCK8、流式细胞周期、 western blot、荧光定量 PCR等技术，进一步探究CD4+ T细胞对前列腺上皮细胞AR信号通路的调控作用及其相关机制。.研究结果：（1）在临床样本中，IHC结果显示CD4+ T细胞浸润区域的AR在上皮细胞中的表达较低。Western blotting结果显示与两种CD4+ T细胞系Molt-3或HH细胞共培养后，三种前列腺上皮细胞系RWPE-1，BPH-1-AR和PWR-1E细胞中的AR的蛋白表达均显著降低。（2）细胞因子阵列分析检测发现BPH-1-AR和RWPE-1细胞与Molt-3和HH细胞分别两两共培养后的上清液中IL-1β升高。Western blot结果显示加入IL-1β后，三种前列腺上皮细胞AR表达降低，而且在共培养环境下加入IL-1β中和抗体后，明显减弱了共培养后的AR表达降低。（3）高通量测序发现CD4+ T细胞和前列腺上皮细胞共培养后BPH上皮细胞中miRNA-15b-5p显著增加。Q-PCR结果显示加入IL-1β后，三种前列腺上皮细胞系中的miR-15b-5p的表达升高。双荧光素酶报告实验结果显示加入miR-15b-5p后野生型AR的荧光变弱，提示其可以与AR mRNA 3’ UTR 区结合。Western blot结果显示加入miR-15b-5p 类似物后，三种前列腺上皮细胞AR表达降低，同时在共培养的环境下加入miR-15b-5p抑制剂后，明显减弱了共培养后的AR的表达降低。结论：BPH中浸润的CD4+ T细胞通过分泌IL-1β调节前列腺上皮细胞中 miR-15b-5p信号抑制前列腺上皮细胞AR的表达。

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