体内凋亡信号分子与常用牙科合金影响机体的关系研究

Before used in clinical, dental alloys has achieved the requirements in standards by passing biological performance evaluation. However, there was common occurrence that dental alloys harmed to oral mucosa in some reports. For this reason, in-depth study about the influences and the mechanism of dental alloys affected organisms was necessary. Project team has found dental alloys could induce cell apoptosis in vitro, but in vivo study was without report. The influences and the mechanism of dental alloys affected oral mucosa in organism were not clear. Base on preliminary studies, this project was planned to establish animal model which oral mucosa was continually stimulated by dental alloys. Distribution in different times ions separated out from dental alloys was detected by ICP-MS and the effect of time – concentration was analyzed. Apoptosis signaling molecules’ expressions of different times were detected by molecular biological methods. The influences of dental alloys affected oral mucosa were studied. The relationship between apoptosis signaling molecules expressed in oral mucosa cells and the time duration of dental alloys affected organisms was announced. The influences and the mechanism of dental alloys affected organism were clear and definite.

虽然牙科合金在临床应用前均通过生物学性能检测并达到相关标准的要求，但其对口腔黏膜造成损害的报道近年屡见不鲜。可见，有必要进一步研究常用牙科合金对生物体的影响及其影响机制。本项目组前期体外研究发现常用牙科合金均不同程度地导致以细胞凋亡为主要模式的细胞死亡，但尚未见体内研究的相关报道。牙科合金对生物体口腔黏膜上皮细胞凋亡的影响及其影响机制也不明确。本项目拟在前期研究的基础上，建立常用牙科合金持续刺激口腔黏膜的动物模型；采用ICP-MS检测口腔黏膜内不同时间点常用牙科合金析出的相应金属离子的种类和水平，并分析其时间-浓度效应；采用分子生物学方法检测口腔黏膜内不同时间点凋亡信号分子的表达水平。研究牙科合金对口腔黏膜的影响，揭示口腔黏膜上皮内凋亡信号分子与常用牙科合金影响机体时间长度的关系，达到明确常用牙科合金对生物体的影响及其影响机制的目的。

近年来，牙科合金对口腔黏膜造成损害的报道屡见不鲜，有必要进一步研究常用牙科合金对生物体的影响及其影响机制。本项目组前期体外研究发现常用牙科合金均不同程度地导致以细胞凋亡为主要模式的细胞死亡，但尚未见体内研究的相关报道。牙科合金对生物体口腔黏膜上皮细胞凋亡的影响及其影响机制也不明确。在此基础上，本项目组已成功构建金黄地鼠动物研究模型（分别采用镍铬，钴铬，纯钛，钯基和金铂合金等常用牙科合金刺激黏膜）。实验中采用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）检测黏膜组织中金属离子的种类、水平，并分析时间-浓度效应，目前已完成14d部分黏膜组织中金属离子的种类与水平的检测。研究发现常用牙科合金刺激口腔黏膜后，金属离子均有不同程度的析出并进入黏膜组织。采用H-E染色后显微镜下观察组织形态学变化，并进行了组织学反应记分，研究发现随着时间延长镍铬合金导致 黏膜组织炎症反应逐渐活跃，组织水肿，血管充血，并有较多炎症细胞浸润；钴铬合金和钯基合金可导致黏膜组织轻微炎症反应；纯钛合金和金铂合金刺激后黏膜无明显变化。采用免疫组化Envision二步法染色后显微镜下观察P53蛋白表达情况，研究发现除金铂合金外，其余四种合金刺激后黏膜细胞中P53蛋白表达水平与阴性对照组相比均有明显升高，并与刺激时间呈正相关。上述研究表明，常用牙科合金刺激口腔黏膜后，金属离子均有不同程度的析出并进入黏膜组织。镍铬合金对口腔黏膜具有一定的刺激性，导致局部炎症反应及P53蛋白表达，并与时间呈正相关；钴铬，纯钛和钯基合金对黏膜刺激影响甚微；金铂合金无刺激作用。. 由于本项目为一年期的小额资助项目，目前尚有28d黏膜组织中金属离子的种类与水平ICP-MS的检测，流式细胞术研究细胞凋亡坏死情况，定量PCR研究凋亡信号分子基因表达情况及Western-blot研究凋亡信号分子蛋白表达情况等部分实验尚在加紧进行中。争取通过上述实验研究牙科合金对口腔黏膜的影响，揭示口腔黏膜上皮内凋亡信号分子与常用牙科合金影响机体时间长度的关系，达到明确常用牙科合金对生物体的影响及其影响机制的目的。

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