新的嗅觉受体突变在再生障碍性贫血骨髓造血微环境损伤中的作用以及补肾健脾祛瘀法的修复机制

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
81774092
项目类别：
面上项目
资助金额：
55.0万
负责人：
叶宝东
依托单位：
浙江中医药大学
学科分类：
H3302.中西医结合临床基础
结题年份：
2021
批准年份：
2017
项目状态：
已结题
起止时间：
2018-01-01 至2021-12-31

项目参与者：
吴迪炯；余道军；刘文宾；胡慧瑾；俞庆宏；张宇；高雁婷；刘梅；孙菊；
关键词：
补肾健脾祛瘀骨髓微环境嗅觉受体再生障碍性贫血

项目摘要

We found a new olfactory receptor mutation, OR56B1, in BMSCs with whole genome sequencing.This project will explore the injury role of OR56B1 mutation to the function of BMSCs,to the maintenance of hematopoietic and stem progenitor cells,and to hematopoietic microenvironment and immune environment,and the repair mechanism of “notifying kidney and spleen and removing stasis”.The products were identified by CCK-8, Annexin V-FITC / PI double staining, western-blot, ELISA, real-time fluorescence quantitative PCR, Transwell, RNA interference, CFSE staining, immunofluorescence staining and gene site mutation,to clarify the following cases,including OR56B1 receptor in BMSCs on the natural expression and role;effects of OR56B1 receptor point mutation on BMSCs ;effects of OR56B1 Mutation on Dicer；the support of OR56B1 receptor point mutation to normal hematopoietic stem cells,the role of OR56B1 receptor mutations to the regulation of immune microenvironment and the effect of “notifying kidney and spleen and removing stasis”on the repair of these lesions.Through the study will let us to understand the role of BMHM on the pathogenesis of AA but also to find a new prognosis and therapeutic target of AA.

我们前期通过全基因组测序发现了再障MSCs中普遍存在新的嗅觉受体OR56B1突变。本项目将探讨OR56B1突变对BMSCs功能，造血干祖细胞维持，造血微环境和免疫环境的影响以及补肾健脾祛瘀法对OR56B1突变的修复作用。项目将通过CCK-8法、Annexin V-FITC/PI双染法、western-blot、ELISA、实时荧光定量PCR、Transwell、RNA干扰、CFSE染色追踪、免疫荧光染色、基因定点突变等技术，来明确以下情况，包括OR56B1受体在BMSCs上天然表达和作用；OR56B1受体点突变对BMSCss影响；OR56B1突变对Dicer的影响；OR56B1受体点突变对正常造血干细胞的支持作用；OR56B1受体点突变对免疫微环境的调控作用以及补肾健脾祛瘀法对上述损伤的修复作用。通过该研究可以深入了解造血微环境在再障发病中的作用，借此寻找新的再障预后判断和治疗靶点。

结项摘要

与健康人相比，再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞存在显著功能损伤，通过基因测序我们发现再障患者骨髓间充质干细胞的嗅觉受体OR56B1存在低表达情况，我们认为该嗅觉受体的低表达可能与再障患者骨髓间充质干细胞功能损伤相关。临床上，我们使用专利中药方剂补肾健脾祛瘀方治疗再生障碍性贫血具有多年经验，并且取得不错疗效，但其疗效机制需要进一步研究。我们通过慢病毒转染敲低骨髓间充质干细胞的OR56B1，检测ATP产生情况筛选出气味剂丁香油酚能够特异性刺激活化OR56B1。丁香油酚对健康人骨髓间充质干细胞无明显毒性，对再障患者骨髓间充质干细胞而言，丁香油酚具有显著诱导细胞凋亡效应。同时我们研究发现补肾健脾祛瘀方体外作用丁香油酚活化的OR56B1低表达骨髓间充质干细胞能够提高细胞活性，增强细胞迁移能力，抑制细胞凋亡。进一步研究发现该效应可能与补肾健脾祛瘀方调控BCL-2高表达相关。这一研究为临床应用补肾健脾祛瘀方治疗再障障碍性贫血提供新的理论依据。