A20/NF-κB信号通路介导的调节性B细胞功能异常在视神经脊髓炎谱系病发病机制中的作用

Neuromyelitis optica spectrum disorder (NMOSD) is an autoimmune disease of the central nervous system. It’s an important cause of disability in Asian youth with limited therapeutic strategy. B cells play an important role in the pathogenesis of NMOSD. Regulatory B cell (Breg) is a subset of B cell exhibiting anti-inflammatory effects mainly by IL-10 production. Our previous study revealed numerical and functional abnormal of Breg in NMOSD patients. A20 is a key regulator of inflammatory signaling pathways and NF-κB inhibitor. NF-κB is a translation regulatory signal of inflammatory related-cytokines. Abnormal of A20/NF-κB pathway is proved to be associated with several autoimmune diseases and B cell production of IL-10 can be inhibited by knocking down A20. We aim to explore the relationship between A20/NF-κB pathway and Breg defect in NMOSD with our newly-established NMOSD model, in order to provide a theoretical basis for Bregs as a target for immune-therapy in NMOSD.

视神经脊髓炎谱系病（NMOSD）是抗体介导的中枢神经系统自身免疫性炎性疾病，致残率高，治疗手段有限。B细胞是NMOSD发病过程的重要参与者。除了促进炎症反应及产生致病性抗体，部分B细胞通过表达IL-10起免疫调节作用，称调节性B细胞（Breg）。我们的前期研究证明：NMOSD患者外周血Breg在数量和功能上存在显著缺陷，参与了该病的发生发展。A20是一种免疫调节蛋白，可调控炎症反应的重要信号分子——NF-κB，后者进一步影响多种炎症相关细胞因子表达。研究表明：A20/NF-κB通路异常与多种自身免疫性疾病相关；抑制A20可减少外周血B细胞IL-10的表达。据此，我们推测A20/NF-κB通路异常是Breg的功能缺陷的上游环节，参与NMOSD的发病过程。并拟建立全新的NMOSD“体外血脑屏障+组织培养”模型，探索Breg的这一通路在NMOSD发病机制中的作用，以期寻找新的治疗靶点。

视神经脊髓炎谱系病复发及致残率高，故进一步总结临床特征，探索发病机制尤为迫切。本研究分析了NMOSD的疾病特点，并建立全新的“体外血脑屏障+组织培养”NMOSD研究模型，用以探索A20/NF-κB通路介导的调节性B细胞功能异常在NMOSD发病机制中的作用。.临床部分，主要进行了以下两项研究：1.归纳AQP4-ab及MOG-ab阳性NMOSD的脊髓炎发病特征，并建立了两种亚群脊髓炎的临床预测模型。相较AQP4-IgG+NMOSD中的脊髓炎，MOGAD脊髓炎发生率较低；前驱流感样症状比例更高，痛性痉挛较少见；长节段脊髓炎比例较低；可出现短节段病变；下胸腰段的受累比例更高而颈段受累较少；横断面上“H征”较为特征；EDSS评分在脊髓炎急性期无显著差别但治疗后评分较低。2. 归纳AQP4-ab及MOG-ab阳性NMOSD的脑炎临床特征。MOG-ab阳性患者中典型脑炎病灶较多。其中孤立皮层病灶最多，常伴发热、颅高压、脑脊液淋巴细胞数增多。多数符合自身免疫性脑炎诊断，部分合并NMDAR-ab阳性。AQP4-ab阳性的患者中，有脑炎表现者较少，无合并NMDAR-ab阳性的患者。恢复期AQP4-ab阳性的患者EDSS评分及CFSS评分较高，提示疾病预后较差。.基础部分，完成了以下工作1.视神经脊髓炎谱系病患者外周免疫状态分析。发现MOG+、AQP4+、两种抗体均为双阴性的NMOSD患者均存在Breg和Bmem的数量失衡，2. AQP4-ab阳性的NMOSD患者外周Breg细胞A20蛋白表达量明显低于正常对照。.体外疾病模型实验部分，构建了有效的体外血脑屏障+组织培养NMOSD模型，将其与患者Breg细胞共培养。通过分析共培养体系炎症因子（包括IL-6和TNFα）和调节性细胞因子（IL-10和TGFβ1）浓度，发现阻断NK-κB（Bay11-7082）使疾病模型的炎症反应更为剧烈，正常对照中Breg对疾病炎症损伤有免疫调节保护功能，而患者的Breg细胞这一功能受损。通过BBB和脊髓组织免疫荧光染色观察，可见疾病模型组内皮细胞及星形胶质细胞足突皱缩、断裂；患者及正常对照Breg均能改善BBB损伤程度，而Bay11-7082能进一步减轻疾病BBB损伤。而敲除Breg的A20会加重脊髓组织病理损害程度，证明A20在疾病的病理损害中具有保护作用。

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