CD23调控BCR信号和肌动蛋白重组机制的研究

Our previous research has shown that BCR signaling can regulate the actin reorganization, while the actin reorganization can offer feedback to the BCR signaling via modulating the spatiotemporal organization of BCR. CD23 has been considered as the co-receptor of BCR, whether it can regulate the early event of B cell activation and actin reorganization is unknown. Previous researches have indicated CD23 can regulate the primary and secondary immune response, but the detail mechanism of CD23 on the development of memory B cells is unknown. Our recent experiments found that the expression of CD23 was reduced in memory B cells. CD23 can regulate the early event of B cell activation and actin reorganization. But the detail molecular mechanisms underlying these processes are still unknown. In this study, we will investigate the detail mechanism of CD23 to affect the development of memory B cells. Next we will focus on the process that how CD23 regulates the early event of B cell activation. Finally, we are going to study the molecular mechanism of CD23 on actin reorganization. Therefore the above study will further understand the detail molecular mechanism of CD23 on regulating the activation of B cells. The original study of this project will be helpful to clarify the mechanism of memory B cell formation. Furthermore, this study will set the theoretical basis for the vaccine design and optimal vaccination.

我们前期研究证实: BCR信号能调控肌动蛋白重组,而肌动蛋白重组能够改变BCR的空间结构并提供反馈给BCR信号。CD23作为BCR的共受体，其是否能调控B细胞早期激活事件和肌动蛋白重组尚属未知。此前的研究表明，CD23能够负调控免疫应答但其在记忆性B细胞发育过程中的具体调控机制却是未知。我们近期实验发现记忆性B细胞CD23降低，CD23能参与B细胞早期激活和肌动蛋白的重组。但其中的具体分子机制仍然是未知。本项目拟阐明：CD23调控记忆性B细胞发育, B细胞早期激活和肌动蛋白重组的分子机制。上述问题的研究会让我们更加深入了解CD23调控B细胞活化的具体分子机制。本项目属原创性研究，有助于阐明记忆性B细胞的形成机制，并为疫苗设计和接种方案优化奠定理论基础。

研究背景.我们前期研究证实: BCR信号能调控肌动蛋白重组,而肌动蛋白重组能够改变BCR的空间结构并提供反馈给BCR信号。CD23作为BCR的共受体，其是否能调控B细胞早期激活事件和肌动蛋白重组尚属未知。此前的研究表明，CD23能够负调控免疫应答但其在记忆性B细胞发育过程中的具体调控机制尚属未知。..研究内容.通过NP-KLH免疫野生型小鼠，然后以免疫后的小鼠脾脏中的同型转换B细胞和抗原特异性记忆B细胞为研究对象来研究CD23对记忆性B细胞发育影响的机制。以CD23 KO小鼠为模型，以分离纯化的B细胞为样本，通过膜抗原来刺激B细胞，探讨BCR的动力学来研究CD23影响B细胞早期激活的机理和肌动蛋白重组的分子机制。..研究结果.我们发现CD23 在记忆性和同型转换B 细胞中的表达比在滤泡B 细胞中显著降低，不管它们是NP阳性或阴性或来自免疫或非免疫小鼠。该结果表明经历同型转换和分化成记忆B 细胞后，CD23 的表达量降低。另外，我们发现和WT B细胞相比，CD23 KO B细胞受膜抗原刺激后B细胞扩张显著增加但BCR中心簇的形成降低。该结果表明，CD23 促进B 细胞收缩，促进BCR微簇并入中央簇。然后我们发现在B细胞受到膜抗原刺激后，和 WT B细胞相比，信号小体在CD23 KO B细胞与膜抗原接触面的招募显著升高，包括总的磷酸化的酪氨酸蛋白和Btk。同时游离抗原刺激B细胞然后通过磷酸化流式定量检测BCR信号分子，包括pErk，pAkt和pBtk。我们发现这些信号分子在CD23 KO B细胞中同样上升。该结果表明CD23能够负向调控BCR信号分子。最后我们发现和WT B细胞相比，肌动蛋白的量在CD23 KO B细胞与膜抗原接触面上升。进而我们检测肌动蛋白聚合的重要分子，磷酸化的WASP蛋白（pWASP）。我们发现pWASP在CD23 KO B细胞与膜抗原接触面的招募显著增加。该结果表明CD23能够通过负向调控WASP进而调控肌动蛋白重组。..研究意义.上述问题的研究会让我们更加深入了解CD23调控B细胞活化的具体分子机制。本项目属原创性研究，有助于阐明记忆性B细胞的形成机制，并为疫苗设计和接种方案优化奠定理论基础。

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