家蝇抗真菌肽分子的克隆表达与生物信息学研究

结题报告
项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    30960343
  • 项目类别：
    地区科学基金项目
  • 资助金额：
    25.0万
  • 负责人：
    吴建伟
  • 依托单位：
    贵州医科大学
  • 学科分类：
    H2203.寄生虫与感染
  • 结题年份：
    2012
  • 批准年份：
    2009
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2010-01-01 至2012-12-31

项目摘要

生物先天性免疫分子抗菌肽具有分子小，抑菌能力强，对热、酸碱及蛋白酶稳定等特点，具备了开发高效、低毒、不易产生耐药性的新型抗生素的潜力，抗真菌肽的研究也成了近年来研究热点。家蝇由于生活在杂菌丛生的环境，具有极强的免疫防御能力。课题组研究发现家蝇三龄幼虫血淋巴中含有多个抗真菌肽组分，并测定了其中一个抗真菌肽N端30个氨基酸序列，精确分子量和等电点，生物信息对比研究表明是一新的抗真菌肽。本研究拟运用RT-PCR、3'/5'RACE、LA-PCR技术，色谱技术，原位分子杂交技术，通过对家蝇幼虫血淋巴抗真菌肽基因克隆、融合体表达、核酸和多肽序列测定、多肽二级结构测定、抗菌作用比较、细胞毒性检测、表达组织定位等方面的研究，并利用网络生物信息与已知昆虫抗菌肽数据进行同源性分析比较，进一步阐明家蝇抗真菌肽的功能特征和生物学特性，为深入开展家蝇多肽免疫体系的研究，和筛选新型真菌抗生素提供科学依据。

结项摘要

1 研究背景：. 目前病原真菌的危害已日益被人们重视，从天然产物中筛选药物先导体，开发新的毒副作用小，疗效高，不易产生耐药的新型抗真菌药物已成为一个重要研究前沿。在本国家自然科学基金项目的资助下，开展了对家蝇幼虫血淋巴抗真菌肽(MAF-1)全长基因的深入研究。.2 目的：家蝇幼虫血淋巴抗真菌肽MAF-1全长序列基因克隆，原核表达体系构建，家蝇体内表达差异，以及分子部分改造研究。.3 主要内容、重要结果及关键数据.3.1 MAF-1目的基因全长序列获得、克隆表达及生物信息学研究：根据MAF-1的N端30个氨基酸序列设计简并引物，克隆了537bp核苷酸构成的MAF-1全长cDNA序列，包含一个开放阅读框，起始密码子和终止密码子，GenBank数据库登录号为HM178948。MAF-1成熟肽的全长氨基酸序列由156个氨基酸残基组成，理论分子量为17184.2Da，等电点为5.37。N端存在一跨膜螺旋区域，具有信号肽，富含α螺旋，其功能结构域正好位于第3个α螺旋区，有2个蛋白激酶C磷酸化位点、1个N端酰基化位点。成功建立了MAF-1全长基因重组BL21/DE原核表达系统，表达产物具有抗白假丝酵母菌（Canidia albicans）活性。.3.2 MAF-1家蝇体内表达差异研究：采用实时荧光定量PCR技术对家蝇抗真菌肽MAF-1基因在家蝇生活史各期及家蝇三龄幼虫不同组织部中的表达差异研究表明，家蝇3龄幼虫经热诱导后12h，MAF-1基因表达水平最高，唾液腺和脂肪体中的MAF-1基因表达水平明显比体壁及肠道高。.3.3 家蝇抗真菌肽MAF-1的抗真菌机制：MAF-1主要对白假丝酵母真菌细胞壁造成破坏，同时对真菌细胞DNA造成损伤。.3.4 MAF-1分子的部分改造及抗真菌机制研究：根据MAF-1结构域，人工改造合成了26个氨基酸组成的具有抗真菌活性的抗菌肽MAF-1A。基本结构为阳离子α-螺旋。初步证明 MAF-1A可通过抑制白假丝酵母菌孢子萌发和芽管的形成，降低真菌对人口腔黏膜上皮细胞粘附能力，从而影响真菌的致病能力。.3.5 MAF-1具有抗肿瘤作用：MAF-1能够抑制SGC7901细胞的增殖，可以下调该细胞G2/ M期CyclinB1和CDK1蛋白表达水平。.4 科学意义：本研究所得资料，对进一步从事家蝇先天性免疫研究，以及开发临床用新型抗真菌药物具有重要价值。

项目成果

期刊论文数量（15）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
家蝇幼虫乙醇提取物的抗炎解热作用及机制
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中国实验方剂学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    常楚瑞;吴建伟;国果;付萍;蒋鹏;吴云;安正粉;CHANG Chu-rui,WU Jian-wei,GUO Guo,FU Ping,JIANG Pe
  • 通讯作者：
    CHANG Chu-rui,WU Jian-wei,GUO Guo,FU Ping,JIANG Pe
家蝇幼虫分泌物对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    时珍国医国药
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    国果;吴建伟;付萍;秦荣贵;张勇;谢佩文;GUO Guo1, WU Jian-wei1*, FU Ping1, QIN Rong-gui2,;2.Pharmacological College,Guiyang Medical Universi
  • 通讯作者：
    2.Pharmacological College,Guiyang Medical Universi
家蝇幼虫血淋巴蛋白MAC-1诱导人宫颈癌细胞凋亡的实验
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    肿瘤防治研究
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    魏洪;吴建伟;国果;付萍;Wei Hong1,Wu Jianwei2,Guo Guo2,Fu Ping2 1.Departme
  • 通讯作者：
    Wei Hong1,Wu Jianwei2,Guo Guo2,Fu Ping2 1.Departme
家蝇幼虫提取物的抗真菌作用研究
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    时珍国医国药
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    付萍;吴建伟;国果;FU Ping, WU Jian-wei, GUO Guo(Basic Medical Colleg
  • 通讯作者：
    FU Ping, WU Jian-wei, GUO Guo(Basic Medical Colleg
家蝇几丁质酶基因的序列分析、克隆和诱导表达
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中国人兽共患病学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    国果;吴建伟;吴沁怡;付萍;张勇;GUO Guo,WU Jian-wei,WU Qin-yi,FU Ping,ZHANG Yong(D
  • 通讯作者：
    GUO Guo,WU Jian-wei,WU Qin-yi,FU Ping,ZHANG Yong(D

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其他文献

家蝇天蚕素Cec4的原核表达与纯化
  • DOI：
    10.13350/j.cjpb.190212
  • 发表时间：
    2019
  • 期刊：
    中国病原生物学杂志
  • 影响因子：
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  • 作者：
    彭建;刘巍巍;吴兆颖;杨燕琴;尚小丽;吴建伟
  • 通讯作者：
    吴建伟
家蝇14-3-3蛋白基因的cDNA克隆与序列分析
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    生物技术通报
  • 影响因子：
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  • 作者：
    吴沁怡;吴建伟;付萍;张勇
  • 通讯作者：
    张勇
家蝇溶菌酶MDLZM基因克隆、表达和序列分析
  • DOI：
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  • 发表时间：
    2015
  • 期刊：
    中国公共卫生
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    彭传林;魏川川;吴建伟;修江帆;王宇
  • 通讯作者：
    王宇
原核表达家蝇Phormicin 蛋白对金黄色葡萄球菌的抑菌活性分析
  • DOI：
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  • 发表时间：
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  • 期刊：
    基因组与应用生物学
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    王兵;杜兵;韦鹏威;黄伟康;姚杨;伍仕梅;万珊;朱贵明;吴建伟
  • 通讯作者：
    吴建伟
家蝇Thymosin(THY)基因的克隆及原核表达
  • DOI：
    10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.02.021
  • 发表时间：
    2015
  • 期刊：
    生物技术通报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    王宇;吴高吉;罗曼;彭传林;修江帆;尚小丽;吴建伟
  • 通讯作者：
    吴建伟

其他文献

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吴建伟的其他基金

家蝇抗真菌肽MAF-1抗真菌活性衍生肽的筛选和作用机制研究
  • 批准号：
    81360254
  • 批准年份：
    2013
  • 资助金额：
    50.0 万元
  • 项目类别：
    地区科学基金项目
家蝇幼虫血淋巴抗真菌肽的特性和分子生物学研究
  • 批准号：
    39970087
  • 批准年份：
    1999
  • 资助金额：
    13.0 万元
  • 项目类别：
    面上项目

相似国自然基金

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AI项目解读示例

课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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