Lnc_bc060912通过调控ABCA1及其膜转位抑制巨噬细胞脂质流出促进斑块进展

Ischemic cerebrovascular disease has become the first cause of morbidity and mortality in China. Atherosclerosis (AS) is the most important vascular lesion. We found that Lnc_bc060912 is involved in the regulation of plaque progression and may be involved in the regulation of macrophage lipid efflux molecules (ABCA1, csABCA1 and Caveolin-1). We intend to prove this hypothesis in vitro and in vivo using a combination of techniques such as immunofluorescence, gene overexpression, gene silencing, RNA-pulldown, and FISH. First, we will explore the role of Lnc_bc060912 in plaque progression and instability. We will then clarify that ABCA1 and Caveolin-1 are direct targets of Lnc_bc060912. Lnc_bc060912 eventually blocks plaque instability by regulating ABCA1 and Caveolin-1 to block cellular cholesterol efflux. Finally, through the regulation of the key molecules Lnc_bc060912, ABCA1 and Caveolin-1, we will determine the best medical treatment to prevent the development of unstable plaque, which will provide new clues for the prevention and treatment of stroke.

缺血性脑血管病已成为我国首位高致死率和致残率疾病，其中动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）是最为重要的血管病变基础。我们发现Lnc_bc060912参与调控斑块的进展，且可能与调控巨噬细胞脂质流出ABCA1、csABCA1及Caveolin-1相关。本项目拟在细胞和动物实验采用免疫荧光、基因沉默及过表达、RNA-pulldown、FISH等多种技术相结合的实验方法。阐明ABCA1和Caveolin-1是Lnc_bc060912的直接作用靶点， caveolin-1是Lnc_bc060912调控ABCA1膜转运的关键，阻碍细胞胆固醇流出，最终导致斑块不稳定的具体机制。通过对关键分子Lnc_bc060912、ABCA1和Caveolin-1的调控，监测并干预不稳定斑块的进展，为防治脑卒中提供新靶点。

缺血性脑血管病已成为我国首位高致死率和致残率疾病，其中动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）是最为重要的血管病变基础。慢性炎症被认为是动脉粥样硬化发生发展的重要病理过程。脱氧核糖核酸（DeoxyriboNucleic Acid， DNA）作为重要的遗传物质，存在于细胞核和线粒体中。越来越多的研究证明，病理状态下，DNA可存在于胞浆中，并被DNA相关感应器感应，激活相关信号通路，触发疾病的发生发展。我们研究发现：1）我们使用C57BL/6纯系背景的载脂蛋白E基因敲除小鼠（ApoE-/-）小鼠，在正常饮食、高脂饲料饮食饲养16周后，对小鼠进行解剖，获取主动脉、心脏，通过免疫荧光检测方法，发现：ApoE-/-小鼠主动脉根部横截面斑块内明显存在氧化性损伤DNA，并且以线粒体损伤为主。 2）我们收集动脉粥样硬化和健康人群的血浆，通过提取血浆DNA 并且量化检测dsDNA水平，发现动脉粥样硬化患者血浆的dsDNA水平较正常人群升高。这些结果表明损伤DNA或者游离的dsDNA可能作为炎症启动信号因子参与AS发生发展。2.进一步研究，我们发现动脉粥样硬化斑块中存在cGAS水平升高，并且主要定位在巨噬细胞。抑制cGAS可减轻巨噬细胞泡沫化。通过生物信息学分析GEO数据库（GSE40156 和 GSE57614），发现：1）ApoE-/-小鼠主动脉存在cGAS升高；2）cGAS表达在M1型巨噬细胞明显升高发现：1）ApoE-/-小鼠主动脉存在cGAS升高；2）cGAS表达在M1型巨噬细胞明显升高。上述进一步提示，cGAS可能存在调控动脉粥样硬化的作用。3.通过使用cGAS抑制剂干预Raw巨噬细胞，进行测序，通过差异分析发现抑制cGAS可减少免疫促炎因子（IL-1B、IL7、IL18）的表达，并且下调STAT1、IRF7等分子，功能分析提示基因主要集中在免疫炎症信号通路，并且可能通过STAT/IRF/干扰素协同介导炎症信号通路调控动脉粥样硬化的发展。上述通过PCR方法检测，进一步证实了抑制cGAS可下调促炎因子IL-1B和STAT1、IRF7，上调抗炎因子IL-10,抑制巨噬细胞向M1极化。

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