酪氨酸磷酸酶PTPN13在肠癌发生中的功能研究

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AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    30971499
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    35.0万
  • 负责人：
    张晓东
  • 依托单位：
    武汉大学
  • 学科分类：
    C0702.细胞信号转导
  • 结题年份：
    2012
  • 批准年份：
    2009
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2010-01-01 至2012-12-31

项目摘要

肠癌是近二、三十年来发病数和死亡数在世界范围内上升最快的肿瘤之一。蛋白酪氨酸磷酸化几乎调控着哺乳动物细胞所有的生命过程。酪氨酸磷酸化调控失调是肿瘤发生的一个重要机制。以往研究发现酪氨酸磷酸酶PTPN13在肠癌中存在突变，而且近一半突变是无义突变或移框突变，推测可能是抑癌基因。因其能与Fas相互作用故又称FAP-1，但PTPN13在Fas介导的细胞凋亡中的功能还不清楚。本研究拟利用AAV介导的体细胞基因敲除技术在肠癌细胞系中获得PTPN13敲除细胞系，一方面通过比较PTPN13野生型和突变体的 表型变化和对Fas介导的细胞凋亡的敏感性，研究PTPN13在Fas信号通路中的功能；另一方面结合蛋白质组学方法筛选PTPN13磷酸酶底物，并进一步验证。通过这一系列的研究，不仅可以阐明PTPN13在肠癌发生中的功能，所参与的信号通路，而且也为肠癌的早期诊断和治疗靶标提供理论基础。

结项摘要

肠癌是近二、三十年来发病数和死亡数在世界范围内上升最快的肿瘤之一。蛋白酪氨酸磷酸化几乎调控着哺乳动物细胞所有的生命过程。酪氨酸磷酸化调控失调是肿瘤发生的一个重要机制。以往研究发现酪氨酸磷酸酶PTPN13在肠癌中存在突变，而且近一半突变是无义突变或移框突变，推测可能是抑癌基因。因其能与Fas相互作用故又称FAP-1，但PTPN13在Fas介导的细胞凋亡中的功能还不清楚。本研究利用AAV介导的体细胞基因敲除技术在肠癌细胞系中获得PTPN13敲除细胞系，比较PTPN13野生型和突变体的表型变化发现，PTPN13对肿瘤细胞的生长具有一定的抑制作用，H2O2处理PTPN13野生型和敲除型HCT116肠癌细胞系后通过流式检测其ROS水平的变化，结果显示HCT116 PTPN13-/-细胞株对H2O2诱导的ROS更敏感。此外结合蛋白质组学方法我们还对PTPN13磷酸酶底物进行了筛选，并进一步验证。通过这一系列的研究，为阐明PTPN13在肠癌发生中的功能，所参与的信号通路提供理论基础。在该经费的资助下已发表SCI论文两篇，培养硕士研究生2名，在读博士生4名，硕士生6名。

项目成果

期刊论文数量（2）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
A one-step cloning method for the construction of somatic cell gene targeting vectors: application to production of human knockout cell lines.
一种构建体细胞基因打靶载体的一步克隆方法：在人敲除细胞系生产中的应用
  • DOI：
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  • 发表时间：
    2012-10-09
  • 期刊：
    BMC biotechnology
  • 影响因子：
    3.5
  • 作者：
    Liu Y;Li S;Zhang H;Wan Z;Zhang X;Du R
  • 通讯作者：
    Du R
A modified plasmid vector pCMV-3Tag-LIC for rapid, reliable, ligation-independent cloning of polymerase chain reaction products
改良的质粒载体 pCMV-3Tag-LIC，用于快速、可靠、不依赖于连接的聚合酶链式反应产物克隆
  • DOI：
    10.1016/j.ab.2010.08.042
  • 发表时间：
    2011-01-15
  • 期刊：
    ANALYTICAL BIOCHEMISTRY
  • 影响因子：
    2.9
  • 作者：
    Du, Runlei;Li, Shangze;Zhang, Xiaodong
  • 通讯作者：
    Zhang, Xiaodong

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  • 通讯作者：
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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

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          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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