Bti毒性蛋白基因重组入球形芽孢杆菌BS-10染色体及其表达和改良菌株活性的研究

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基本信息

  • 批准号：
    30901246
  • 项目类别：
    青年科学基金项目
  • 资助金额：
    20.0万
  • 负责人：
    赵松
  • 依托单位：
    江苏省血吸虫病防治研究所
  • 学科分类：
    H2205.传染病媒介生物
  • 结题年份：
    2012
  • 批准年份：
    2009
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2010-01-01 至2012-12-31

项目摘要

控制蚊虫是防治疟疾、乙型脑炎等多种人类传染疾病的重要措施。由于长期大量使用化学农药灭蚊可能带来农药残留等环境问题和耐药性的产生，蚊虫的生物防治具有独特优势。球形芽胞杆菌（Bs）和苏云金芽胞杆菌以色列亚种（Bti）这两种重要的生物灭蚊蚴剂在活性蛋白，作用机制，杀蚊谱等方面有所不同。本课题组前期工作已克隆到Bti的毒性蛋白基因cry4Ba、cryllAa和cyt1A，并在大肠杆菌中进行了表达。为应用Bti的毒性基因来改良球形芽孢杆菌Bs-10菌株这一我国重要的杀蚊菌资源，本项目拟采用转座子介导的基因重组方法将Bti毒性基因重组入Bs的染色体，对Bti毒性基因的表达及活性进行检测，定位其在Bs染色体上的整合位点，以期重组菌株能表达Bti的毒性蛋白并稳定遗传，提高Bs灭蚊蚴效能，拓宽杀蚊谱。本项目探索用基因工程手段改良Bs-10菌株的新方法，为建立广谱，高效生物灭蚊蚴剂打下理论和技术基础。

结项摘要

本研究采用转座子介导的基因重组方法，对建立具有广谱高效杀蚊效应的Bs-10株球形芽孢杆菌改良工程菌进行了探索。在当前生态文明建设的要求下，蚊虫的生物防治对于补充和替代化学农药灭蚊，控制疟疾、乙型脑炎等多种蚊媒疾病具有重要意义。本研究克隆了Bti毒性蛋白基因cry4Ba、cryllAa和cyt1A，并在大肠杆菌中进行了原核表达；建立了将转座子衍生载体重组质粒转化到球形芽孢杆菌Bs-10菌株中的方法，通过对感受态的培养，制备，转化缓冲液的选择，转化后复苏等实验参数的试验，发现Bs-10菌株在营养缺乏条件下培养制备感受态，电击转化效率能得到明显提高；检测了Bti毒性基因在Bs-10转化菌株中的表达，并筛选和优化了重组质粒中目的基因上游的启动子序列，为外源基因在野生型球形芽孢杆菌中的成功表达进行了探索并积累经验。

项目成果

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专著数量（0）
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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

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          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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