锌指核酸酶定点突变转基因山羊外源性GFP基因的研究

结题报告
项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    31101871
  • 项目类别：
    青年科学基金项目
  • 资助金额：
    23.0万
  • 负责人：
    袁玉国
  • 依托单位：
    扬州大学
  • 学科分类：
    C1809.临床兽医学
  • 结题年份：
    2014
  • 批准年份：
    2011
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2012-01-01 至2014-12-31

项目摘要

本项目以F1代转GFP基因山羊胎儿成纤维细胞为研究对象，基于人工锌指核酸酶基因打靶理论，通过对转染细胞中外源GFP基因靶向序列分析、突变事件发生和细胞表达绿色荧光的比例以及强度的变化，探讨人工锌指核酸酶介导山羊胎儿成纤维细胞中外源基因靶向修饰的可能性，并揭示靶向序列发生修饰的方式和效率，同时结合细胞稀释法获得GFP突变型单克隆细胞株；分别以GFP突变型细胞和正常细胞为供核细胞构建重构胚，比较二者在各期胚胎发育率上的差异，并获得GFP突变型转基因克隆山羊，以探讨人工锌指核酸酶介导基因靶向修饰对克隆胚胎发育的影响，同时建立以锌指核酸酶技术为基础的动物转基因体细胞克隆技术平台。为锌指核酸酶技术结合体细胞核移植技术生产转基因克隆羊、转基因动物标记基因敲除提供理论和技术支持。

结项摘要

基因组靶向修饰是近年来生命科学研究的热点之一，特别是在基因功能分析、生产模式动物、治疗人类疾病和优良家畜育种等方面，基因组靶向修饰具有广阔的应用前景。本项目针对获得无标记基因转基因羊的目的和要求，在锌指核酸酶基因打靶载体构建、载体打靶功能检验、打靶效率和突变方式和山羊体细胞核移植等技术环节上开展了研究相关研究工作，建立山羊GFP基因组打靶相关技术体系，打靶效率达到5%；优化了山羊转基因克隆技术体系，获得了2只活的转基因克隆羊。为锌指核酸酶技术结合核移植技术生产转基因克隆羊、转基因动物标记基因敲除提供理论和技术支持。

项目成果

期刊论文数量（13）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
Hybrid expression cassettes consisting of a milk protein promoter and a cytomegalovirus enhancer significantly increase mammary-specific expression of human lactoferrin in transgenic mice
由乳蛋白启动子和巨细胞病毒增强子组成的混合表达盒显着增加转基因小鼠中人乳铁蛋白的乳房特异性表达
  • DOI：
    10.1002/mrd.22063
  • 发表时间：
    2012-08-01
  • 期刊：
    MOLECULAR REPRODUCTION AND DEVELOPMENT
  • 影响因子：
    2.5
  • 作者：
    Cheng, Yong;An, Li-You;Yang, Ting-Jia
  • 通讯作者：
    Yang, Ting-Jia
江苏中部地区猪大肠杆菌病血清型鉴定及毒力基因的调查
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    黑龙江畜牧兽医
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    袁玉国
  • 通讯作者：
    袁玉国
诱食剂对育肥猪生产性能的影响
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    中国畜牧兽医
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    艾静;朱飞晶;袁玉国
  • 通讯作者：
    袁玉国
Generation of human lactoferrin transgenic cloned goats using donor cells with dual markers and a modified selection procedure
使用具有双标记的供体细胞和改进的选择程序生成人乳铁蛋白转基因克隆山羊
  • DOI：
    10.1016/j.theriogenology.2012.05.027
  • 发表时间：
    2012-10-01
  • 期刊：
    THERIOGENOLOGY
  • 影响因子：
    2.8
  • 作者：
    An, Li-You;Yuan, Yu-Guo;Cheng, Yong
  • 通讯作者：
    Cheng, Yong
猪喘气病自家苗的制备及其效果观察
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    黑龙江畜牧兽医
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    袁玉国
  • 通讯作者：
    袁玉国

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其他文献

酸性离子液体催化降解纤维素的研究
  • DOI：
    10.16581/j.cnki.issn1671-3206.20160201.007
  • 发表时间：
    2016
  • 期刊：
    应用化工
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    付霓虹;袁玉国;王景芸;王强;臧树良
  • 通讯作者：
    臧树良
酸性离子液体降解纤维素制备5-羟甲基糠醛的研究
  • DOI：
    10.14159/j.cnki.0441-3776.2016.04.011
  • 发表时间：
    2016
  • 期刊：
    化学通报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    付霓虹;袁玉国;王景芸;臧树良
  • 通讯作者：
    臧树良

其他文献

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相似国自然基金

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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