从TRPV1通道蛋白表达变化探索肠吉泰治疗IBS内脏高敏感大鼠镇痛作用的机理

Professor Caigan is the famous Chinese medicine doctor in shanghai,his Prescription-Decoction CJT is effective in treating IBS. Decoction CJT composed of Chinese medicine theory "softening the liver and nourishing the spleen" as a guide,to getting the role of analgesic and antidiarrheal. The total clinical efficiency is 86.67%. Experimental results show that Decoction CJT can significantly antagonist the generating of SP,5-HT,and MC in IBS model rat. Based on these results, combined with foreign literature, the TRPV1 expression in IBS rat's colon, dorsal root ganglia and hypothalamic, and the relationship between 5-HT/SP, envisaged in the colon to stimulate 5-HT expression leads to the dorsal root ganglion5-HT2a/5-HT7 change, stimulate cellular calcium influx, expression of TRPV1 sensitization, SP pathway leads to the occurrence of IBS abdominal pain, this study using a rat model of visceral hypersensitivity, TRPV1 antagonist positive control, intestinal guitar Thailand after treatment, the abdominal wall implant myoelectric activity change of the electrode was detected by immunohistochemistry, westernblot method of analysis of the hypothalamus, and dorsal root ganglion and in the colon of TRPV1, 5-HT2aR,5-HT7R, the SP expression changes, measured the concentration of intracellular calcium. This study reveal the treatment of IBS analgesia mechanism of Decoction CJT from the hypothalamus - the spinal cord - Colon channel and provide a theoretical basis for its efficacy on IBS.

肠吉泰是上海市名中医蔡淦教授治疗IBS经验方，以柔肝健脾为理论指导，有理想的镇痛、止泻作用，临床研究总有效率达86.67%；实验研究结果：该药能显著拮抗IBS模型大鼠体内SP、5-HT、MC等致痛物质产生。基于以上结论，结合国外文献中IBS大鼠TRPV1在结肠、背根神经节、下丘脑表达变化与5-HT/SP之间关系，设想结肠刺激下5-HT表达导致脊髓背根神经节5-HT2a、5-HT7变化，刺激细胞钙离子内流，TRPV1致敏，SP表达途径导致IBS腹痛发生，因此本研究拟采用内脏高敏感性大鼠模型，以TRPV1拮抗剂做阳性对照，经肠吉泰治疗后，用腹壁埋植电极法检测肌电活动变化，通过免疫组化、westernblot方法分析大鼠下丘脑、背根神经节及结肠内TRPV1、5-HT2aR、5-HT7R、SP表达变化，测细胞内钙浓度，从下丘脑-脊髓-结肠途径揭示肠吉泰治疗IBS镇痛机理，为其治疗IBS提供理论依据

肠易激综合征（IBS）是临床常见的慢性功能性肠疾病之一，临床上缺乏针对性的有效治疗手段。肠吉泰是上海市名中医蔡淦教授研制的经验方，治疗腹泻型肠易激综合征（IBS-D）具有镇痛、止泻的良效。前期实验研究发现，肠吉泰能显著拮抗IBS-D模型大鼠体内P物质、5-HT、MC等致痛物质的产生，从而改善IBS-D大鼠肠动力紊乱和内脏感觉过敏状态。为了深入探索肠吉泰治疗IBS-D内脏高敏感大鼠镇痛作用的机理，设想从TRPV1通道蛋白的变化进一步研究。采用Al-chaer直肠醋酸刺激法建立内脏高敏感性大鼠模型，TRPV1阻断剂Capsazepine腹腔注射做为阳性对照。实验一：大鼠肠道敏感性评估和RT-PCR法测定肠吉泰对IBS模型大鼠下丘脑、脊髓背根神经节（DRG）、结肠TRPV1、SP、5-HT2aR、5-HT7R表达的影响。结果：当气囊压力在60mmHg时，模型组大鼠腹外斜肌电压值较正常组明显升高 (P<0.05)，肠吉泰高剂量治疗组大鼠腹外斜肌电压较模型组明显降低(P<0.01)；模型组大鼠下丘脑、DRG、和结肠组织TRPV1含量较正常组明显增高(P<0.05)；肠吉泰中、高剂量组大鼠上述组织内各指标表达量均较模型组明显降低 (P<0.05或P<0.01)。实验二：用免疫组化方法检测肠吉泰对IBS模型大鼠上述组织TRPV1、SP、5-HT2aR、5-HT7R表达的影响。结果：下丘脑、DRG、和结肠等部位均显示，模型组大鼠上述指标含量较正常组明显升高（P<0.01），各药物治疗组的上述组织内各种指标含量均较模型组明显降低（P<0.01）。实验三：肠吉泰对IBS模型大鼠下丘脑、DRG、结肠Ca2+浓度的影响。结果：模型组大鼠下丘脑、DRG细胞内钙离子浓度均较正常组显著升高（P<0.05或P<0.01），肠吉泰各治疗组钙离子浓度较模型组有所下降，其中高剂量组较模型组有显著降低（P<0.05或P<0.01）。结肠细胞内钙离子在模型组较正常组显著降低（P<0.01），各药物治疗组较模型组显著升高（P<0.05或P<0.01）。结论：肠吉泰能下调IBS模型大鼠的内脏高敏状态，RT-PCR和免疫组化两种方法检测结果基本一致，肠吉泰可能通过下调下丘脑、结肠和DRG内上述指标表达量来降低内脏敏感性。肠吉泰同样能下调下丘脑和DRG细胞内钙离子浓度，这与TRPV1的表达结果基本一致。

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