靶向IL-6基因慢病毒介导RNA干扰治疗鼠胶原诱导性关节炎的实验性研究

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基本信息

  • 批准号：
    81671603
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    57.0万
  • 负责人：
    王吉波
  • 依托单位：
    青岛大学
  • 学科分类：
    H1107.自身免疫性疾病
  • 结题年份：
    2020
  • 批准年份：
    2016
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2017-01-01 至2020-12-31

项目摘要

IL-6 plays an important role in the pathogenesis of rheumatoid arthritis, blocking the IL-6-mediated inflammatory signaling pathway can relieve joint inflammation reaction and improve the prognosis. Currently biologics IL-6 receptor antagonist tocilizumab injection made significant efficacy in clinical. In this study，by Liposome-mediated chemical synthesis of siRNA transfecting of mouse macrophage cell line Raw264.7, we observe its effect on macrophage expression and secretion of cytokines such as IL-6 using Real-Time PCR and ELISA. We designed shRNA taking use of screening siRNA fragments, constructed lentiviral vector, and packaged into a lentivirus particles,then immunized DBA / 1 mice with bovine collagen type Ⅱ to produce CIA, trying through intravenous injection targeting IL-6 shRNA lentivirus , assessmented lentiviral vector-mediated IL-6 RNA interference therapeutic effect of collagen-induced arthritis by CIA arthritis improvement of arthritis score and joint inflammation tissue infiltration. We may explore a new treatment techniques for curing rheumatoid arthritis in this way.
白介素6在类风湿关节炎发病机制中起重要作用,通过阻断IL-6介导的炎症信号通路可阻断关节炎症反应改善预后。目前生物制剂IL-6受体的人源化单克隆抗体托珠单抗注射液在临床中取得显著疗效。本研究应用脂质体介导化学合成siRNA的方法转染小鼠巨噬细胞株Raw264.7，采用Real-Time PCR和ELISA方法观察其对巨噬细胞表达和分泌IL-6等细胞因子的影响。利用经过筛选的siRNA片段设计成shRNA，构建表达shRNA的慢病毒载体，并将其包装成慢病毒颗粒。用牛Ⅱ型胶原免疫DBA /1小鼠制作CIA，尝试使用CIA尾静脉注射表达靶向IL-6 shRNA慢病毒的方法，通过CIA关节炎分值及关节炎症组织浸润改善情况评价慢病毒载体介导的IL-6 RNA干扰对胶原诱导性关节炎的治疗作用，探索类风湿关节炎的一种新的治疗技术。

结项摘要

目的：探讨靶向小鼠白细胞介素-6（IL-6）基因RNA干扰慢病毒载体颗粒（LV-IL6-RNAi）对小鼠巨噬细胞株J774A.1细胞IL-6表达的影响，及其对胶原诱导性关节炎（CIA）的治疗作用。方法：设计合成3对特异性针对小鼠IL-6基因的小干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）序列，筛选高效siRNA序列按慢病毒载体构建要求，构建高效LV-IL6-RNAi。LV-IL6-RNAi感染小鼠巨噬细胞株J774A.1细胞，用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测J774A.1细胞的IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和IL-1β mRNA相对表达水平，以检测LV-IL6-RNAi体外干扰效率。构建胶原诱导性关节炎模型（CIA），设LV-IL6-RNAi组、LV-NC-RNAi组、甲氨蝶呤（MTX）阳性对照组、PBS空白对照组，分别关节腔注射LV-IL6-RNAi、LV-NC-RNAi、腹腔注射MTX、PBS溶液，观测CIA小鼠关节炎评分，ELISA检测小鼠IL-6、IL-1β和TNF-α血清水平，组织病理检测炎症关节的炎性细胞浸润数量。结果：成功构建了高效LV-IL6-RNAi。在体外J774A.1细胞水平上，LV-IL6-RNAi组IL-6 mRNA相对表达水平显著性低于LV-NC-RNAi组、培养基空白对照组。首次免疫注射后第28-35天成模，建模率为96.43％。首次免疫注射后第35天，CIA-LV-IL6-RNAi组关节炎评分开始降低，首次免疫注射后第42天，CIA-LV-IL6-RNAi组关节炎评分显著性低于CIA-LV-NC-RNAi、CIA-PBS组。CIA-LV-IL-6-RNAi组IL-6、IL-1β及TNF-α血清水平显著性低于CIA-PBS组、CIA-LV-NC-RNAi组；CIA-LV-IL6-RNAi组和CIA-MTX 组炎症关节病理切片高倍镜下炎症细胞的浸润数量均显著性少于CIA-LV-NC-RNAi组和CIA-PBS组。结论：成功构建的高效LV-IL6-RNAi，可作为类风湿关节炎（RA）实验性基因治疗的有效手段。

项目成果

期刊论文数量（4）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
lncRNA MIAT 在巨噬细胞炎症反应中的作用
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2020
  • 期刊：
    中国免疫学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    王子叶;杨堃;温大蔚;赵磊;王吉波
  • 通讯作者：
    王吉波
靶向IL-6慢病毒介导RNA干扰实验性基因治疗类风湿关节炎
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中国免疫学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    孙琳茜;王子叶;王丽芹;李清;常晓天;王吉波
  • 通讯作者：
    王吉波
Effectiveness of lentivirus-mediated RNA interference targeting mouse tumor necrosis factor alpha in vitro and in vivo
慢病毒介导的RNA干扰靶向小鼠肿瘤坏死因子α的体外和体内有效性
  • DOI：
    10.3892/etm.2017.5609
  • 发表时间：
    2018
  • 期刊：
    Experimental and Therapeutic Medicine
  • 影响因子：
    2.7
  • 作者：
    Wang Jibo;Zhao Yingjie;Xin Miaomiao;Pan Lin;Wang Liqin;Yang Kun
  • 通讯作者：
    Yang Kun
IL-6 promotes collagen-induced arthritis by activating the NLRP3 inflammasome through the cathepsin B/S100A9-mediated pathway
IL-6 通过组织蛋白酶 B/S100A9 介导的途径激活 NLRP3 炎症小体，促进胶原诱导的关节炎
  • DOI：
    10.1016/j.intimp.2020.106985
  • 发表时间：
    2020-11-01
  • 期刊：
    INTERNATIONAL IMMUNOPHARMACOLOGY
  • 影响因子：
    5.6
  • 作者：
    Wang, Hongyue;Wang, Ziye;Wang, Jibo
  • 通讯作者：
    Wang, Jibo

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其他文献

具有独立安装时间和恶化效应的单机成组排序问题研究
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2017
  • 期刊：
    沈阳航空航天大学学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    王吉波;赵伯来
  • 通讯作者：
    赵伯来
基于截断学习效应的流水作业排序问题研究
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2017
  • 期刊：
    重庆师范大学学报(自然科学版)
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    王雪茹;白雪莲;王吉波;殷娜
  • 通讯作者：
    殷娜
带准备时间的单机指数时间学习效应排序问题
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2017
  • 期刊：
    运筹与管理
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    闫萍;王吉波;赵礼强
  • 通讯作者：
    赵礼强
具有共同松弛时间的恶化型工件排序问题研究
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    大连理工大学学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    王吉波;王建军;何平;WANG Ji-bo 1,WANG Jian-jun 2,HE Ping 2(1.School of;2.Institute of Systems Engineering,Dalian Universi
  • 通讯作者：
    2.Institute of Systems Engineering,Dalian Universi
A note on resource allocation scheduling with group technology and learning effects on a single machine
集群技术资源分配调度及其在单机上的学习效果笔记
  • DOI：
    10.1080/0305215x.2016.1265305
  • 发表时间：
    2017-01
  • 期刊：
    Engineering Optimization
  • 影响因子：
    2.7
  • 作者：
    Lu Yuan-Yuan;王吉波;Ji Ping;He Hongyu
  • 通讯作者：
    He Hongyu

其他文献

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

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          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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