PICK1对心脏局部交感神经递质的平衡调控机制研究

去甲肾上腺素转运蛋白（NET）介导交感神经突触中去甲肾上腺素（NE）的再摄取，其表达和活性的调控在精神、神经系统及心血管疾病中发挥着重要作用。NET是PICK1的天然配体，PICK1介导的NET在细胞内的表达和亚细胞定位可能对其介导的NE再摄取功能有重要影响。本研究在我们既往发现PICK1可调控神经元中配体蛋白的基础上，拟体外培养293T细胞，观察PICK1和NET的相互作用以及PICK1共转染对NET的表达和亚细胞定位的影响，并检测其中可能的分子机制。接下来利用PICK1基因敲除小鼠模型，观察PICK1缺乏状态下心脏NET、PICK1、β肾上腺素受体的表达及NE浓度和NE再摄取功能的特点，并检测心脏结构和功能变化。目的在于揭示PICK1对NET的表达和亚细胞定位的调控，并探讨PICK1介导的NET调控在心脏交感神经兴奋和心肌重塑中的作用，为心血管疾病的发病机理和治疗提供新的靶点。

为观察蛋白激酶C结合蛋白1（PICK1）和去甲肾上腺素转运蛋白（NET）的相互作用及其在心力衰竭中的影响，本研究利用细胞免疫荧光染色、实时荧光定量PCR及Western blot等分子生物学方法，在阿霉素诱导的心力衰竭小鼠模型和PICK1基因敲除小鼠模型中的结果发现：（1）体外培养的293T细胞中， PICK1与NET共转染可以相互作用形成共聚体，而PDZ结构域突变体PICK1 KD-AA则不能与NET形成共聚体；（2）阿霉素诱导的充血性心力衰竭小鼠心脏中NET存在转录后的表达下调，而酪氨酸羟化酶代偿性表达增加；（3）心力衰竭小鼠心脏PICK1的表达下调；（4）PICK1基因敲除小鼠心脏的NET表达下调。上述结果表明PICK1可以介导NET的亚细胞定位，PICK1-NET的相互作用可能参与心力衰竭的发生发展。我们假设心力衰竭时PICK1的表达下调使其不能有效介导NET在突触膜上的转运，可能是心力衰竭时NET的表达和功能异常的原因之一。

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