A20-尘螨T细胞表位肽外泌体疫苗促进Th1细胞分化治疗过敏性鼻炎的作用及机制研究

尘螨抗原表位疫苗给上呼吸道过敏性疾病的治疗带来希望。然而T细胞表位疫苗的优化及其诱导抗原特异性Th1细胞反应的机制仍未明了。A20作为TNF-α诱导蛋白可负性调控过激的免疫反应，诱导耐受型DC产生，有望协同T细胞表位疫苗调控过敏反应Th1/Th2细胞失衡。另外如何经免疫原性低、易于被靶细胞摄取的载体递送T细胞表位仍有待进一步探讨。前期研究中，我们分析鉴定了尘螨主要抗原T细胞表位并纯化了A20蛋白，本研究探讨了（1）同时负载Der p2、Der f2抗原T细胞表位肽及A20的外泌体疫苗（ErDer-A20）的构建，及其IgE、T细胞反应性分析；（2）ErDer-A20对小鼠AR治疗效果；（3）ErDer-A20诱导产生耐受型DC及Th1型细胞反应的表观遗传学调控机制。研究结果：①成功构建了ErDer-A20疫苗；②ErDerA20疫苗滴鼻明显缓解小鼠AR临床表现，降低了鼻分泌物EPX和MCC、血清sIgE、sIgG1、血清IL-4, IL-5水平；ErDerA20诱导鼻粘膜IL-10+ DCs（TolDC），TolDC进而诱导具有抑制抗原特异性T细胞增殖功能的Treg；③ErDer-A20预处理的小鼠脾脏来源DC与CD4+T细胞共培养，RNAseq分析上述T细胞，结果显示Th1反应的代表基因（IFN-γ等）显著上调，Th2反应有关的基因（IL-4等）显著下调，和内质网应激有关的基因（Ire1等）产生相应变化。来源AR病人周围血标本PBMC，和DC共培养（DC分未经刺激的，和经ErDer-A20刺激的两种）,结果显示，ErDer-A20促进CD4+CD25+T细胞表达Th1细胞因子，下调Th2细胞因子表达；ErDer-A20处理的DC诱导CD4+CD25+T细胞内质网应激；流式细胞术检测发现Th1细胞频率上调，Th2细胞频率下调，与相应基因检测描述一致。结论：ErDer-A20疫苗具有高效，蛋白纯度高，低致敏性优点，能够抑制实验性AR小鼠过敏炎症，机制与ErDerA20诱导出耐受型DC有关，ErDer-A20疫苗预处理的DC能使CD4+T细胞发生Th1反应偏移，诱导CD4+CD25+T细胞内质网应激。ErDer-A20有望替代过敏原特异性免疫治疗成为有效的治疗手段。在项目执行期间，发表了高水平SCI论文11篇，培养了博士研究生2名，硕士研究生4