高效特异清除凋亡细胞的小胶质细胞亚群的鉴定及其免疫生物学功能研究

小胶质细胞是中枢神经系统（CNS）重要的免疫细胞，具有吞噬清除、抗原提呈、免疫调节等功能，其生物学功能表现出广泛的异质性，已不能用传统的小胶质细胞是否激活来解释。我们前期研究发现小胶质细胞存在一种对清除凋亡细胞、诱导细胞相关抗原耐受具有高生物学活性的独特群体，对维护CNS免疫内环境稳定具有重要作用。本课题将利用小胶质细胞ex vivo分离培养、凋亡细胞吞噬实验、表达谱芯片、多荧光流式细胞术、抗原提呈与耐受等实验，分析确定该亚群的表面标志，研究其抗原提呈与免疫耐受功能，明确该亚群细胞在天然免疫分子表达、细胞运动行为等基本免疫生物学特性，阐明其对诱导自身凋亡细胞相关抗原耐受方面的功能，研究其在稳定CNS免疫环境稳定中的作用，并探索性开展利用该亚群细胞在EAE模型上的免疫耐受诱导实验。本课题将在亚群层面拓展对小胶质细胞及其清除凋亡细胞功能的认识，为深入理解小胶质细胞提供重要科学基础。

小胶质细胞是中枢神经系统中重要的免疫细胞，具有吞噬清除、抗原提呈、免疫调节等功能，其生物学功能表现出广泛的异质性，本课题将分析异质性小胶质细胞表面标志，明确其免疫分子表达、细胞运动行为等免疫生物学特性，研究其在稳定CNS免疫环境稳定中的作用。本课题建立优化ex vivo分离小胶质细胞方法，用四密度梯度分离、合并以及贴壁振荡方法纯化，纯度为90-95%，并避免磁珠分选法诱发细胞表型漂移；为满足表达谱检测分析的纯化，采用含有RNase与蛋白酶抑制剂和表面活性剂的组织保存液处理脑组织，利用percoll和荧光抗体分选，有效稳定细胞RNA和膜蛋白，纯度超98%。改良ex vivo小胶质细胞分离技术、用于表达谱和RNAseq用途的脑组织急性分离液技术正在撰写国家发明专利申请书。研究小鼠体内模型分离ex vivo小胶质细胞的免疫生物学特性，以流感病毒感染、LPS刺激、EAE模型潜伏期为刺激因素，研究不同病理条件下小胶质细胞极化特性及其免疫生物学特性变化规律。利用流感病毒感染神经胶质细胞诱导促炎症因子检测小胶质细胞功能，含炎症因子的条件上清可激小活胶质细胞免疫状态和一定程度的炎症因子级联反应。完成神经元凋亡细胞诱饵的制备和小胶质细胞特异性吞噬凋亡神经元的亚群分选实验，获得了2群具有表达差异和改变的候选基因，确立了8组候选亚群生物标记，利用荧光标记的凋亡神经元的碎片研究小胶质细胞吞噬神经元碎片的比例及其相应分子转录水平的变化等。检测小胶质细胞与神经元相互作用，多种条件下小胶质细胞除可直接发挥吞噬活性清除受损神经元外，还可利用分泌细胞因子改变CNS内环境，引发神经元生物学特性变化，IL-6及TNF-α对钠电流起抑制作用，并呈现出时间和剂量的依赖性，上调钠离子通道表达，但未改变通道电压依赖的激活和失活特性。ex vivo分离小鼠左右皮质和海马小胶质细胞，分析左右和不同解剖部位小胶质细胞免疫生物学特性差异；使用LPS脑内注射、流感病毒外周感染等CNS免疫微环境失稳，研究生理与病理条件下小胶质细胞在免疫生物学特性上变化与特征；本课题资助研究发表论文13篇（SCI论文6篇），其中第一作者/通讯作者论文12篇（SCI论文5篇）。培养硕士研究生7名（毕业4名）、联合培养博士生3名（毕业2名）。顺利完成课题研究计划。

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