蝎毒增殖肽BmKpp促辐射后造血细胞增殖作用的分子靶标研究

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
81172599
项目类别：
面上项目
资助金额：
69.0万
负责人：
董伟华
依托单位：
广州医科大学
学科分类：
H29.放射医学
结题年份：
2015
批准年份：
2011
项目状态：
已结题
起止时间：
2012-01-01 至2015-12-31

项目参与者：
孔天翰；王彩霞；刘四红；王燕；吴敏燕；李婷；明慰；邢百倩；周美汛；
关键词：
辐射增殖细胞损伤

项目摘要

骨髓是易受放射损伤的组织，骨髓中的两大细胞群MSCs和HSCs均与辐射后造血功能的恢复有关。蝎毒增殖肽BmKpp是本课题组从东亚钳蝎蝎毒中分离的一种新的多肽（发明专利已公布），BmKpp显著促进辐射后骨髓基质细胞的增殖，促进造血集落的形成，增加鹅卵石造血区(CAFC)数目，使骨髓细胞衰老数目减少，上调白细胞介素-3受体（IL-3R）的表达。BmKpp具有类细胞因子作用。本项目以骨髓MSCs为细胞模型，采用细胞荧光术检测BmKpp与细胞结合的部位；放射受体配基结合分析法观察BmKpp与细胞膜受体的相互作用；亲和层析、SDS-PAGE和质谱鉴定等方法，分析和确定BmKpp促进辐射后造血细胞增殖的作用靶标，阐明BmKpp的类细胞因子作用的机制。BmKpp具有自主知识产权，属于源头创新，BmKpp分子靶标的发现具有重大的理论和应用价值，有助于揭示蝎毒素影响细胞功能的新的分子作用机制。

结项摘要

一、研究背景和主要研究内容. 前期研究结果表明，蝎毒多肽具有类细胞因子作用，能够促进骨髓细胞增殖和集落形成。本项目是以骨髓MSCs 为细胞模型，探讨蝎毒多肽的作用靶标，阐明类细胞因子作用的机制。. 二、本项目重要结果、关键数据及其科学意义. （一）蝎毒多肽的分离纯化：①从东亚钳蝎蝎毒中分离出纯度达95%以上的蝎毒毒素多肽B5（scorpion venom peptide B5, SVPB5），进行了精确分子量和氨基酸序列测定后，认定SVPB5为一新的多肽。已申请发明专利（申请号：201410706200.9）；②分离纯化出另外一个新的多肽B4（SVPB4），并已申请发明专利（申请号：201510415391.8）。. （二）SVPB5功能研究：.1、SVPB5对正常和辐射后大鼠间充质干细胞（rBMSCs）的生长和集落形成以及衰老的影响：①显著促进正常和辐射后rBMSCs的增殖；②能够促进正常和辐射后rBMSCs的集落形成，保护或恢复辐射后rBMSCs干性的作用，有利于辐射后干细胞的增殖与分化；③降低正常及辐射后rBMSCs的β-半乳糖苷染色阳性细胞率，对正常及辐射rBMSCs均具有抗衰老作用；.2、SVPB5显著降低致死量全身辐射（TBI）后小鼠的死亡率，延长辐射后小鼠的生存时间，具有显著的辐射保护作用；促进TBI后小鼠的骨髓造血细胞集落的形成，加速辐射后小鼠外周血白细胞及血小板的恢复；减少辐射后ROS的生成，减轻辐射诱导的DNA损伤，并可能通过ROS-p16 / p21通路促进辐射后骨髓的造血恢复和提高生存率。首次证明，1/40 LD50的SVPB5既能有效地保护辐射动物的骨髓造血功能。.3、SVPB5分子靶标的鉴定：差异表达基因分析结果表明，SVPB5处理后有8个细胞因子基因、1个细胞因子受体基因表达上调；选择CXCL3、CXCL5进行RT-PCR验证。结果表明，SVPB5处理后CXCL3、CXCL5基因的差异表达情况与测序结果基本一致。。.本项目结果进一步证实，SVPB5具有类细胞因子作用，其作用于rBMSCs后的特征表达谱是细胞因子和/或细胞因子受体基因。该结果有助于揭示蝎毒素影响细胞功能的新的分子作用机制，目前尚未见同类报道，拟申报发明专利。