长链非编码RNA CIKI调控草酸钙结晶肾损伤的机制研究

The initial process of nephrolithiasis, preventation and management of crystal induced kidney injury remain to be solved. Crystal induced oxidative stress and inflammatory cell infiltration were recognized as the key issues of tubular-intestinal change during the kidney injury. Oesteopontin（OPN） secreted from stimulated renal epithelial cells could recruit the migration of macrophages, which was believed as the accelerated factor of kidney injury. Nevertheless, the precise mechanism of OPN induction was not well known. Long non-coding RNA(LncRNA) is a cluster of moleculars with powerful capacity of gene regulation. Based on the rodent model of calcium oxalate depositon in kidney, LncRNA array detection was conducted and mutiple LncRNA with differential expression were found. One of them, named CIKI (temporary)with significant increaseing after the crystal induction was inhibited in vitro, and the crystal induced OPN experssion in tubular cells was decreased as well. According to the preliminary results, the following aims will be explored. (1)Exact pattern of interaction between CIKI and OPN；（2）The possibility of using CIKI as a biomarker in nephrolithiasis；（3）Evaluate the role and potiential theraputical targeted for CIKI in crystal induced kidney injury. Thus it would provide the experimental evidence to help the intervention of crystal induced kidney injury.

作为结石的早期表现，结晶导致的肾脏损害尚缺乏有效的防控手段。其主要病理机制在于结晶直接刺激小管上皮细胞诱发的氧化应激反应和炎细胞浸润，从而造成小管间质损伤。上皮细胞受到刺激后分泌骨桥蛋白（OPN）并召募巨噬细胞迁移是这一病变中重要的加速环节，但调控OPN分泌的确切机制尚不清楚。长链非编码RNA（LncRNA）可以在多个水平上影响蛋白质的表达。我们前期成功制备了草酸钙结晶小鼠肾损伤模型，利用lncRNA芯片筛选发现，损伤的肾组织中有多条差异表达的LncRNA。其中一条lncRNA CIKI（暂命名）变化幅度较大，抑制后，OPN表达也显著下调。以此为基础，本课题拟开展如下研究（1）确证CIKI和OPN相互作用的具体方式；（2）CIKI作为结石高危人群预警标志物的可能性；（3）CIKI作为结晶诱导肾损伤治疗干预靶点的可行性。从而为临床结晶所致肾脏损伤的诊断及治疗提供理论及实验依据。

本项目围绕结晶肾损伤，着力探讨草酸钙结晶和小管上皮细胞之间的相互作用，落脚于由此引发的肾实质的纤维化，以期为慢性肾脏病的防治提供参考。在课题进展过程中项目组有如下发现：.一、临床研究提示罹患结石患者肾功能减损速率较非结石患者为快，提示结石对肾实质细胞造成影响，课题组开展体内、外研究发现草酸钙结晶可以造成小管上皮细胞上皮-间质-转分化，而且这一转分化过程不依赖于TGF-beta活化的smads通路，这一发现提示结晶肾损伤确实可以加速肾实质纤维化的发生。给予Rho激酶抑制剂、组蛋白去乙酰化酶抑制剂以及传统中药血尿安、肾茶提取物可以在不同程度上减轻这一病变的进展，缓解肾功能的恶化；但具体结晶-细胞相互作用的调控机制还需进一步分析。.二、小鼠来源的长链非编码RNA CIKI在草酸钙结晶肾损伤的病理生理过程中扮演重要角色，可以调控骨桥蛋白OPN的表达，但和骨桥蛋白之间不存在直接的相互作用；根据同源性分析，人来源的长链非编码RNA CHCHD4P4在体外培养草酸钙结晶肾损伤中作用显著，其表达差异可以影响结晶诱导的上皮间质转分化作用，但和其发生直接相互作用过的分子并不能直接参与到结晶肾损伤的病理生理过程，这一作用提示CHCHD4P4很可能是具有疾病标志物意义的长链非编码RNA，而不一定是具有调控价值的RNA。.三、课题组利用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱技术，从代谢物层面对结晶肾损伤以及结晶-细胞的相互作用进行了轮廓分析，提示以色氨酸代谢异常是结晶肾损伤的重要特征，并得到了一系列具有标志物潜力的代谢物，为后续研究拓展了方向。.本项目开展期间，共发表标引资助的SCI收录论文6篇，中文核心期刊论文6篇，并以本项目研究内容为重要基础，围绕结晶肾损伤，课题负责人和课题组成员获批国家自然科学基金3项、上海市相关基金资助3项，累计经费近200万元。以本研究相关成果为重要基础，获2016年上海市中西医结合科技奖一等奖，举办国家级继续教育项目3期，培养博、硕士研究生13人，形成了良好的多学科协作的研究氛围，学术影响力不断扩大。

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