RHAMM影响类风湿关节炎成纤维滑膜细胞迁移和侵袭以及其分泌细胞因子能力的研究

Rheumatoid arthritis is a chronic and refractory autoimmune disease that affects joints. Fibroblast-like synoviocytes（FLS）are critical for the pathogenesis of rheumatoid arthritis, they increase in number as part of the pannus, a tumorlike structure that causes significant joint destruction.Migration and invasion of synoviocytes contribute significantly to rheumatoid arthritis. FLS in the synovial also play a key role by secrete cytokines that perpetuate inflammation to degrade cartilage and bone and contribute to joint destruction. If fibroblast-like synoviocytes were controlled that means rheumatoid arthritis were controlled. Receptor for hyaluronan mediated motility (RHAMM) is a kind of hyaluronic acid (HA) receptor and has many intracellular and extracellular function, is intimately involved in the biology of cancer. So maybe RHAMM could inhibited migration of synoviocytes and infiltration of inflammation, we hypothesized RHAMM is involved in mediate synoviocytes migration and function of promoting inflammation. Techniques of siRNA and gene knockout mice were used to test the hypothesis. The purpose of this research was to determine if RHAMM are implicated in human rheumatoid arthritis and found a new therapy for this disease.

类风湿关节炎（RA）是一种以关节炎为主要表现的难治性自身免疫病，其病理基础是滑膜炎，患病早期即出现成纤维滑膜细胞增生和血管翳形成。滑膜细胞异常增殖并具有向远处迁移和侵袭的能力；其分泌的炎性细胞因子和基质降解酶促使炎性反应持续进行；最终出现肿瘤样改变，破坏关节结构引起狭窄和畸形。控制滑膜细胞功能即可控制类风湿的发展。透明质酸(HA)介导的细胞游走受体(RHAMM )具有促使细胞运动和增殖的能力，因此我们假设RHAMM在滑膜细胞中表达并通过调节滑膜细胞的功能促进类风湿关节炎的发展。本研究拟通过siRNA技术干扰RHAMM在滑膜细胞中的表达后观察该细胞的迁移、侵袭功能和分泌细胞因子的能力，证实RHAMM是类风湿发病的关键因素。并通过RHAMM基因敲除小鼠的关节炎重建过程反向验证该假设。该研究的完成有助于开发抑制类风湿滑膜细胞增生的药物，对类风湿关节炎的防治具有重要意义。

研究背景：类风湿关节炎（RA）是一种以关节炎为主要表现的难治性自身免疫病，其病理基础是滑膜炎，患病早期即出现成纤维滑膜细胞（FLS）增生和血管翳形成。滑膜细胞异常增殖并具有向远处迁移和侵袭的能力；其分泌的炎性细胞因子和基质降解酶促使炎性反应持续进行；最终出现肿瘤样改变，破坏关节结构引起狭窄和畸形。控制滑膜细胞功能即可控制类风湿的发展。透明质酸(HA)介导的细胞游走受体(RHAMM)具有促使细胞运动和增殖的能力，因此我们假设RHAMM在滑膜细胞中表达并通过调节滑膜细胞的功能促进类风湿关节炎的发展。研究内容：本研究拟通过siRNA技术干扰RHAMM在滑膜细胞中的表达后观察该细胞的迁移、侵袭功能和分泌细胞因子的能力，证实RHAMM是类风湿发病的关键因素。并通过RHAMM基因敲除小鼠的关节炎重建过程反向验证该假设。完成了类风湿关节炎小鼠模型（CAIA小鼠）的建立，关节炎指标测定和记录，小鼠各组织脏器及关节标本的留取，留取并培养CAIA鼠和对照鼠两组小鼠成纤维滑膜细胞，观察FLS细胞分泌多种细胞因子，增殖、迁移和侵袭能力的差异。小鼠留取各组织器官标本行免疫组化及Western blot检测不同脏器及组织中RHAMM表达差异。收集类风湿关节炎患者及对照者外周血细胞及RA滑膜细胞，检测在人类不同组织和细胞中RHAMM的表达差异。原代培养类风湿关节炎成纤维滑膜细胞，siRNA干扰技术干扰FLS中表达的RHAMM，观察滑膜细胞中IL-6和IL-8炎性细胞因子在mRNA水平及蛋白质水平的表达差异，观察FLS的增殖、迁移和侵袭能力。分别培养两组小鼠成纤维滑膜细胞，观察 FLS分泌炎性因子、增殖、迁移和侵入能力的差异。结果：类风湿关节炎患者FLS的RHAMM表达明显高于骨关节炎患者FLS，与对照组相比，CAIA小鼠关节滑膜组织中RHAMM表达明显增加，RHAMM沉默siRNA不仅可以降低IL-6和IL-8的产生，而且可以抑制RA-FLS的迁移和侵袭，因此证实RHAMM在FLS诱导的RA炎症和关节损伤。科学意义：该研究的完成对RHAMM参与RA发展的机制进行了深入的研究，有助于开发抑制滑膜细胞功能的药物，对类风湿关节炎的防治具有重要意义。

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