意大利蜜蜂级型分化关键基因Dnmt3启动子的分析及其上游转录调控因子的鉴定

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项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号:
    31402147
  • 项目类别:
    青年科学基金项目
  • 资助金额:
    26.0万
  • 负责人:
  • 依托单位:
  • 学科分类:
    C1708.养蜂学
  • 结题年份:
    2017
  • 批准年份:
    2014
  • 项目状态:
    已结题
  • 起止时间:
    2015-01-01 至2017-12-31

项目摘要

Dnmt3 is a key gene for honeybee caste differentiation. It regulates the caste differentiation of female honeybee by altering the DNA methylation state of its downstream target genes at the larvae stage. Our previous studies have found that the honeybee Dnmt3 gene exhibit differences in mRNA transcription between queen larvae and worker larvae during the critical period of larvae caste differentiation. However, the mechanism leading to this difference is unclear. This study was aimed to identify the critical transcriptional regulation regions of the honeybee (Apis mellifera ligustica) Dnmt3 promoter, identify transcription factors binding to the Dnmt3 promoter, and analyze the function of the identified transcription factors. Through these studies, we hope to clarify the regulation mechanism of honeybee Dnmt3 gene from the molecular level, and make the regulatory network of the honeybee caste differentiation become completed.
Dnmt3基因为调控蜜蜂级型分化的关键基因,在雌性蜜蜂幼虫期,它通过改变下游基因的DNA甲基化状态来调控雌性蜜蜂的级型分化。我们的前期研究表明 Dnmt3基因在蜂王幼虫和工蜂幼虫分化的关键时期存在mRNA转录差异,但是对于造成这种转录差异的调控机理还不清楚。本研究期望鉴定出蜜蜂(Apis mellifera ligustica)Dnmt3基因启动子的关键转录调控区域,鉴定出结合在这些关键调控区域的转录因子,对这些转录因子进行功能分析。希望通过这些研究弄清蜜蜂Dnmt3基因受到转录调控的具体分子机理,完善蜜蜂级型分化调控网络。

结项摘要

Dnmt3基因为调控蜜蜂级型分化的关键基因。本研究对意大利蜜蜂Dnmt3基因转录起始位点进行了鉴定,发现意大利蜜蜂Dnmt3基因存在多个启动子,转录出多种mRNA剪切形式,编码不同的蛋白。共鉴定出5种不同的选择性剪切形式,分别命名为Amdnmt3-R1、-R2、-R3、-R4、-R5,mRNA 长度分别为3514 nt、3678 nt、2799 nt、2301 nt、2668 nt,编码1112 aa、1113 aa、916 aa、701 aa、808 aa。.双荧光素酶报告基因实验表明Amdnmt3的启动子在HEK293细胞中具有转录活性,且在该启动子序列上有多个SP1结合位点。我们对SP1基因在意大利蜜蜂中的同源基因Amsp4基因进行了克隆,Amsp4基因mRNA长为2614 nt,编码831 aa,C端具有3个C2H2锌指结构域。意大利蜜蜂SP4蛋白与人、小鼠、大鼠SP1蛋白的相似性分别为33.69%、33.10%、33.06%,在3个C2H2锌指结构域处的相似性均为93.98%。EMSA实验表明AmSP4蛋白能结合到Amdnmt3基因启动子上。对意大利蜜蜂幼虫中Amsp4进行RNAi之后Amdnmt3的表达量显著降低。荧光定量PCR结果表明:在48h,Amsp4基因在蜂王幼虫和工蜂幼虫间无显著表达差异;在84h,Amsp4基因在工蜂幼虫中的表达量显著高于蜂王幼虫(p<0.05);在120h,Amsp4基因在蜂王幼虫中的表达量显著高于工蜂幼虫(p<0.05)。这说明Amsp4基因在蜂王和工蜂幼虫间的表达差异调控了Amdnmt3的表达。.本研究还对所有在西方蜜蜂蜂王幼虫和工蜂幼虫间有表达差异的转录因子进行了分析。发现有501个转录因子在蜂王幼虫和工蜂幼虫间有表达差异,其中,348个仅在蜂王幼虫中上调表达,90个仅在工蜂幼虫中上调表达,有63个在不同发育阶段的蜂王幼虫和工蜂幼虫间表现出不同的上调或下调趋势。

项目成果

期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Genome-wide DNA methylation changes associated with olfactory learning and memory in Apis mellifera.
与蜜蜂嗅觉学习和记忆相关的全基因组 DNA 甲基化变化
  • DOI:
    10.1038/s41598-017-17046-1
  • 发表时间:
    2017-12-05
  • 期刊:
    Scientific reports
  • 影响因子:
    4.6
  • 作者:
    Li Y;Zhang LZ;Yi Y;Hu WW;Guo YH;Zeng ZJ;Huang ZY;Wang ZL
  • 通讯作者:
    Wang ZL
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  • DOI:
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  • 发表时间:
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  • 期刊:
    昆虫学报
  • 影响因子:
    --
  • 作者:
    胡弯弯;李淑云;曾志将;颜伟玉;王子龙
  • 通讯作者:
    王子龙

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课题项目:调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要:

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题,其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子,其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而,TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用,影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法,探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用,为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义,并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路:

科学问题:TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达?
前期研究:已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应,但其具体机制尚不明确。
研究创新点:本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线:包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术:TRIM2与病毒RNA的相互作用分析,IFN-β启动子活性检测。
实验模型:使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

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          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
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          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
      
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