AT1受体自身抗体通过增强AT1受体敏感性加重腹主动脉瘤的作用及机制研究

Abnormal activation of angiotensin II type 1 receptor (AT1R) is closely related to the formation and development of abdominal aortic aneurysm (AAA), but the mechanism of abnormal activation of AT1R is unclear. We previously found that autoantibodies against AT1R (AT1-AA) existed in AAA patients. AAA-related pathological changes could be observed in mice immunized with AT1-AA, but the role and mechanism of AT1-AA in the development of AAA were unclear. The purpose of this study is to explore the role of AT1-AA in AAA by means of Doppler ultrasound, Gomori staining, gelatin zymogram, with the use of animal models and AT1R-/-mice; to explore the effects of AT1-AA on the binding ability and downstream effects of AngII and AT1R by means of radioligand binding, calcium tracing and NFAT detection; to identify the role of conformational alteration and endocytosis inhibition in AT1-AA-enhanced AT1R sensitivity to AngII, by means of BRET, FRET, point mutation and endocytosin overexpression. To prove the hypothesis: AT1-AA induces conformational alteration and/or endocytosis inhibition of AT1R, which increases the sensitivity of AT1R to AngII, and aggravates AAA.

血管紧张素II（AngII）1型受体（AT1R）异常激活与腹主动脉瘤（AAA）发生发展密切相关，但AT1R异常激活的机制不清。我们前期发现，AAA患者体内存在AT1R激动型自身抗体（AT1-AA），用AT1-AA免疫小鼠可出现AAA相关病理改变，但AT1-AA在AAA发生发展中的作用及机制不清。本研究拟通过多普勒超声、Gomori染色、明胶酶谱等方法，运用动物模型及AT1R-/-小鼠探究AT1-AA在AAA发生中的作用；通过放射配体结合、钙示踪、NFAT检测等方法探究AT1-AA对AngII与AT1R结合及下游效应的影响；利用BRET、FRET、点突变、内吞蛋白过表达等方法，明确AT1R构象变化和/或内吞抑制在AT1-AA增强AT1R对AngII敏感性中的作用。拟证明假说：AT1-AA引起AT1R构象变化和/或内吞抑制，使AT1R对AngII敏感性增加，从而与AngII协同作用加重AAA。

腹主动脉瘤是一类高风险的心血管疾病，由于导致其发生的原因及机制尚不完全清楚，因此药物治疗方式有限。肾素-血管紧张素-醛固酮系统是体内重要的体液调节系统，参与调节血管的病理生理功能。大量研究表明，血管紧张素II-1型受体自身抗体（AT1-AA）广泛存在于多种心血管疾病患者的体内，且能够促进疾病的发生发展。另一方面，研究证实，AT1-AA可以持续激活AT1R，使得受体下游信号过度激活，但相关机制不清。本项目将基础研究与临床应用相结合，探究AT1-AA在腹主动脉瘤发生中的作用及机制。主要发现：①AT1-AA在腹主动脉瘤患者人群血清中含量较高；对照、腹主动脉瘤、主动脉夹层三组人群之间的血清AT1-AA水平存在显著的统计学差异，腹主动脉瘤和对照组、主动脉夹层和对照组之间存在显著的统计学差异，但腹主动脉瘤和主动脉夹层组之间没有显著的统计学差异；根据 AT1-AA > 2.1 作为诊断cutoff，区分腹主动脉瘤和对照的诊断试验结果，灵敏度和特异度分别为51.7% 和82.5%；AT1-AA每升高一倍，腹主动脉瘤的发生风险增至2.12倍；②AT1-AA与AngII联合使用加重小鼠动脉瘤，表现为发生率增加，主动脉直径增大，弹力板断裂增加；③转录组测序结果提示，AT1-AA组血管壁炎症及细胞外基质重组相关通路变化显著；小鼠在体实验表明，AT1-AA加重血管壁炎症水平及基质金属蛋白酶的表达，从而加重腹主动脉瘤发生；④AT1R阻断剂替米沙坦显著逆转了AT1-AA加重腹主动脉瘤的作用；⑤机制上，AT1-AA通过增加AngII与AT1R相互作用力及信号效力增加受体敏感性。本研究阐明了AT1-AA增加AT1R敏感性，进而加重腹主动脉瘤的作用和机制。该研究有助于进一步了解肾素-血管紧张素-醛固酮系统在腹主动脉瘤发生中的作用及机理，并可为针对AT1-AA阳性腹主动脉瘤患者的药物研发提供重要的理论依据。.此外，我们发现，AT1-AA可引起小血管重塑，机制上与BK通道功能抑制有关。BK通道激动剂逆转了AT1-AA引起小血管重塑的病理效应。

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